丁苯酞通过抗凋亡作用而减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的神经损害.pdfVIP

中文摘要 丁苯酞通过抗凋亡作用而减轻实验性自身免疫性 脑脊髓炎小鼠的神经损害 摘 要 目的：多发性硬化(multiple 胶质细胞增生、轴索病变和进行性神经功能障碍为主要特点的常见的中枢 神经系统炎性脱髓鞘疾病。该病病程反复，致残率高，加重家庭与社会负 担。但是引起多发性硬化的确切的病因及其发病机制目前尚不清楚。目前 认为是由于环境因素、遗传易感性、自身免疫异常、氧化应激反应等多种 因素综合作用的结果。 细胞凋亡涉及一系列基因的激活、表达以及调控，是一种由基因调节 控制的细胞程序性死亡过程。目前大量研究己证明：线粒体是内源性细胞 凋亡信号转导途径中起至关重要作用的细胞器，而线粒体的结构和功能障 碍导致细胞凋亡，最终导致多发性硬化和EAE模型中髓鞘脱失、轴索和神 经元的变性。 国家食品药品监督管理局首次批准丁苯酞可以应用于中风患者。实验证明 丁苯酞可以通过改善供血、保护血脑屏障、抗血栓形成、改善线粒体功能 等途径发挥脑保护作用，目前广泛应用在治疗缺血性脑血管病方面，并已 取得良好效果。但目前国内外对于丁苯酞对于多发性硬化是否具有治疗作 用的研究很少，关于丁苯酞对多发性硬化线粒体结构和功能损伤以及对多 发性硬化的细胞凋亡影响，尚未见报道。本研究通过观察对丁苯酞对实验 autoimmune 性自身免疫性脑脊髓炎(experimental 小鼠神经细胞是否具有保护作用，从而为临床治疗多发性硬化提供新的方 法。 实验性自身免疫性脑脊髓炎是目前国内外公认的多发性硬化研究的 理想动物模型，是一种以中枢神经系统内小血管周围单个核细胞浸润及髓 鞘脱失为特征的自身免疫性疾病。本实验以丁苯酞作为干预药物，通过观 察实验动物神经功能评分及Tunel染色阳性细胞表达变化情况，探讨丁苯 酞能否通过抗细胞凋亡作用而减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经 万方数据 中文摘要 损伤作用，为临床探索新的治疗方法提供理论依据。 方法： 1实验动物购买与饲养：选择健康C57BL／6雌性小鼠45只，周龄介于 6．8周，体重在180,、-2209之间，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。 随机分笼，以标准饲料、自来水饲养于河北医科大学第二医院神经内科实 验室实验动物中心，环境恒温20,--．25℃。 只)。另取9只正常小鼠为正常对照组(N，生理盐水0．1ml／d／只)。小鼠发 病当天(O天)，地塞米松组、丁苯酞低剂量组及高剂量组分别于发病后 每日腹腔注射相应剂量药物。正常组及EAE组仅每日腹腔注射相应剂量的 生理盐水，共14天。各组再以发病后0天、7天、14天分为三个亚组，每个 亚组3只小鼠。 3 按1：1等体积加入完全弗氏佐剂(加入结核杆菌H37Ra使其终浓度为 4mg／m1)，混合乳化。充分乳化后将小鼠用乙醚麻醉，将小鼠充分固定 腔注射0．5mlPTX。正常组小鼠不作上述处理。 4实验小鼠神经功能评分：自免疫当天起每日早晚两次(间隔约8小 时)，由两名观察者同时对小鼠进行称重、神经功能评分。采用国际通用 的Benson(5分)评分标准对实验小鼠进行神经功能评分： 具体评分标准如下：O分无任何临床症状；1分小鼠尾部张力消失，不能 上抬，步态可见轻度笨拙；2分小鼠双后肢均无力，被动翻身可恢复；3 分小鼠双后肢瘫痪，被动翻身后，不能自行恢复，但是给予刺激后可以 挪动；4分小鼠双后肢瘫痪，前肢瘫痪或肌力减弱伴尿便失禁；5分濒临 死亡或死亡。评分时如果小鼠临床症状介于两个评分之间，则选取较低分 数3no．5分来表示。 5取材：于发病当天(O天)：EAE组、正常对照组各取3只；发 病第7天、14天：EAE组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组、地塞米松 万方数据 中文摘要 盐水心脏灌注(流出液无血液后)，再以4％多聚甲醛经心脏灌注后，取 脊髓腰膨大处组织常规石蜡包埋，制成石蜡切片，5岫连续切片。应用 Tunel染色法测定凋亡阳性细胞数目变化情况。