《发育过程中苹果果实的β—淀粉酶、活性、数量变化和亚细胞定位》.pdfVIP

维普资讯 中 目 柳 孚 (C 辑) 第 32卷 第 3期 scIENCEIN CHINA (SeriesC ) 发育过程 中苹果果实的 I]；．淀粉酶 ：活性 、 数量变化和亚细胞定位米 王永章 张大鹏料 (中 农业人学植物生理生化 家重点开放实验室，果树分子发育实验室，北京 100094) 摘要 淀粉 降解代谢与种子萌发、叶片光合作用 、块根贮藏及 肉质果实的发育密切 相关．体外酶学实验普遍认为，B一淀粉酶是催化淀粉水解的重要酶之一，然而由于其在 生活细胞 中经常定位于叶绿体或质体之外，与淀粉基质在亚细胞水平上相互隔离，所 以该酶在植物活体 内的生理功 能至今 尚不清楚．用苹果果实进行 的实验表 明，在果实 发 育过程 中，B一淀粉酶活性由低到高，与淀粉含量大致呈现互为消长 的变化．Western blotting实验证明，在果实发育过程 中，B一淀粉酶的表观数量也是 由少到多，与活性的变 化一致．利用胶体金免疫 电子显微镜定位技术证 明，果实 内B一淀粉酶主要定位于质体 内，围绕淀粉粒分布较多，其他亚细胞 区域 内B一淀粉酶分布很少，说 明该酶主要分布于 其功能 区域，这种亚细胞分布特 点在果实整个生长发育期没有变化．在亚细胞水平上 明确地展示 出植物生活细胞 中B一淀粉酶与其淀粉基质居于同一亚细胞 区域 内．质体 内 胶体金分布密度 随着果实发育的推进增加显著，发育后期的质体 内或淀粉粒上存在高 密度 的胶体金颗粒，这个结果与Westernblotting实验相互印证．可以认为，B一淀粉酶参 与 了果实细胞质体 中淀粉的水解过程． 关键 词 p-淀粉酶 Westernblotting 亚细胞定位 苹果果实 淀粉降解代谢与种子萌发、叶片光合作用、块根贮藏及 肉质果实的发育密切相关 】【 ．大 部分体外生物化学研究证实，淀粉完全水解主要需要 0一【淀粉酶 (EC 3．2．1．1．)、D一淀粉酶 (EC 3．2．1．2．)、脱分枝酶 (EC3．2．1．41)和 0一【葡糖苷酶 (EC3．2．1．20)的协 同作用，其 中Oc一淀粉酶直接水 解完整 的淀粉粒，释放 出糊精，然后 由B一淀粉酶等 3种酶将糊精水解为麦芽糖乃至葡萄 糖 ’ ．但是，迄今为止 ，仅在拟南芥 叶片 中，有 明确 的证据显示活细胞 内淀粉 的水解需 要Oc．淀粉酶的参与 ¨，除此之外，植物活体组织 中淀粉 降解 的整个途径基本上没有定论 ，而且 有不少研究结果并不完全支持以上有关淀粉水解 的模式 3【-4’】．体外酶学实验普遍认为B一淀粉 酶是催化淀粉水解 的重要酶之一 ’’】，但是，目前仅从拟南芥叶片 中分离出一个编码淀粉 酶定位于叶绿体中的信号肽基因 …，此前从大麦 、拟南芥 和甘薯 等植物中分离的B一淀 粉酶 的前体，并不包含引导此蛋 白定位于质体 内的N段过渡肽序列，所以，B．淀粉酶 向质体定 位的信号肽存在 的普遍性至今并不清楚，而且，实验也表明，B一淀粉酶在活细胞 中确实经常定 位于叶绿体或质体之外，从而与催化反应 的底物在空间上分离 ， -2 引，所 以该酶在植物 2001．04—23收稿，2001．10．18收修改稿 家 自然科学基金(批准号 39870487，3o07O532)和 国家重点基础研究计划 (批准号 ：G1999011700)资助项 目 ” 联 系人，E·mail：zhangdp@ 95777com 维普资讯 中 围 科 学 (C 辑) 第 32卷 活体内到底执行什么生理功能至今 尚不能确定 3【。，，35~411． 淀粉是包括苹果果实在 内的许多 肉质果实发育过程 中碳 同化物 的一种过渡形式，贮存于 活细胞 内有生活力 的叶绿体或质体 中，其合成及降解代谢与果实发育密切相关-】。。· l，目前 对果实淀粉积累