《农杆菌介导的黄瓜活体植株转基因方法研究》.pdfVIP

分子植物育种，2014年，第 12卷，第4期，第 796—801页 MolecularPlantBreeding，2014，Vo1．12，No．4，796—801 技术主题 TechnologyFeature 农杆菌介导的黄瓜活体植株转基因方法研究 魏爱民 杜胜利 韩毅科 刘楠 天津科润黄瓜研究所，天津，300192 通讯作者，dshengli@aliyun．com 摘 要 为建立简单高效的黄瓜转基因技术体系，本研究以携带有抗除草剂Bar基因的农杆菌工程菌浸泡 处理开花期黄瓜嫩梢，进行活体植株转基因方法研究。研究结果表明最佳转化体系为：表面活性剂 silwet一77 适宜浓度0．01％～0．05％；菌液浸泡最佳位置为顶部以下 10cm嫩梢，最适子房发育时期为开花前 5-12d子 房；农杆菌菌株 EHA105浸染效果优于LBA4404；3次重复浸泡处理有利于提高转化频率。黄瓜苗期除草剂 抗性筛选适宜浓度为 17％草胺膦 1100倍稀释液。研究获得除草剂抗性植株 1320株，PCR阳性植株 36株， 其中30株经 Southern斑点杂交后有阳性信号，最高转化效率为9．5％。 关键词 黄瓜，转基因，活体植株，抗除草剂 StudyonTransformationTechnologyThroughAgrobacterium tumefaciens MediationinLivingCucumberPlants W eiAimin DuShengli HanYike LiuNan TianjinKernelCucumberResearchInstitute，Tianjin，300192 Correspondingauthor，dshengli@aliyun．com DOI：10．13271~．mpb．012．000796 Abstract Toestablishasimpleandefficientcucumbertransforillationmethod，anew transformationmethod through soakingcucmu bershootsintosolutionofAgrobacterium tumeq％iensstrainwithBra genewasstudied． Theresultsindicatedthattheoptimalsurfactantsilwet一77concenrtationwas0．01％~0．05％．theoptimalsoaking positionwastop 10 cm long shoots，theoptimalovary stage fortransfomr ationwas5-12 dbeforeanthesis． Agrobacterium strainEHA105wasbetterthanLBA4404inrtna sfomr ationefficiency，3timesofrepeatsoaking treatmentwasbeneficialofrtransfomr ation．Theoptimalglyphosateconcentrationofrherbicideresistantplants screeningwas1100timesdilutionofthe17％ origina1．Among1320herbicideresistantplants，36werePCR positive．withinwhich30plantswereSouthern blottingpositive．Thehighesttransformationefficiencywas9．5％． Keywords Cucmu ber(CucumisSativusL．)，Transformation，Livingplants，Herbicideresistant 黄瓜 CucumisSativusL．)是中国重要的蔬菜作 植株，由于步骤繁琐，基因型差异明显，转化率较低， 物之一，目前其品种选育仍 以常规育种为主，由于现 且组培转化过程易产生体细胞变异，常使转基因植 有种质资源缺乏抗病、抗虫、抗逆等优异材料，阻碍 株在育种中无法应用。此外，研究人员通过开展电击 了重大突破性新品种选育。通过基因工程方法导入 法(徐华强等，1991)、基因枪法(Kodamaeta1．，1993)、 优异外源基因，创造黄瓜育种新种质，将成为提升我 花粉管通道法(李远新等，2000)等黄瓜转基因研究， 国黄瓜品种选育水平的重要手段。 可避开组织培养过程