假单胞菌JW12脂肪酶的补料分批发酵.pdfVIP

维普资讯 、 一 一 ／ t- 第 18卷第 2期 无 锡 轻 工 大 学 学 报 Vol 18．No．2 1999年 6月 JournalofW uxiUniversityofLightIndustry 』un．．1999 文章编号 ：i001—7453(1999)02—002305 假单胞菌 JWJ2脂肪酶的补料分批发酵 () 支J徐 柔：章克昌 一 (无镊轻工大学生 程学 苏无锡214036) 摘要： 研究了假单胞苗JWlg脂肪酶在 2L和 25L容积发酵瞄的补料分批发酵工艺 通过 调整碳源补加速率 ．控制产酶期发酵液 PH在 8．2左右 ，能有效提高脂肪酶的酶活和表观生 产率．在 25L标准发酵罐中，连续补加吐温一80．最高脂肪酶酶活为 129．2~mol／(min ·mI，)． 表观生产率为 l5．91． 关 键 词 ：假单胞菌}脂肪酶 }补料分批发酵 发醵 中圉分类号 丽 6——■乏 补料分批发酵是在分批培养过程 中间歇或连续地补加新鲜培养基的培养方法l1]．由于 补料分批发酵能够调节发酵培养基中的营养物质浓度，一方面可 以避免某种营养成分 由于 初始浓度过高而出现底物抑制或阻遏现象，另一方面能防止某些限制性营养成分在培养过 程 中被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成．自20世纪初开始用于酵母生产 以来，补料分 批发酵技术 已广泛应用于抗生素、氨基酸、酶制剂 、有机酸等的生产领域．从资料所报道的研 究结果看，采用补料发酵工艺的脂肪酶酶活远高于分批发酵工艺的脂肪酶酶活．以葡萄糖为 碳源 的2L罐培养 Pseudomonas生产脂肪酶 ，流加培养与未补加培养相 比，脂肪酶产生水平 由 0．173#otol／(rain ·mL)升至 0．8#otol／(rain ·mL)口]．通 过优 化培 养 Pseudomonas aeruginposaEF2产脂肪酶的条件，表 明在吐温 80限量流加培养 以及低 比生长速率的连续 培养中，脂肪酶活力均可达到最大 ]．在培养 Pseudomonas厂2UOYeSce~$的生产过程 中，监测 COz释放速率 以估测碳源橄榄油的需求，或依据浊度 自动补加橄榄油和 Fe离子，使发酵液 的橄榄油底物和细胞中Fe离子浓度都处于半缺陷状态 ]．在各 自最优 的橄榄油与流加速 率比值下 ，发酵液的脂肪酶酶活从 间歇发酵的200~mol／(min ·mL)分别跃升至 1980 ~mol／(rain ·mL)和 5600~mol／(min ·mL)．与传统间歇发酵相 比，补料分批发酵中，脂肪 酶的表观生产率和产率大幅度提高． 在以假单胞菌 Jw12为研究对象、吐温一8o为碳源的摇瓶发酵实验 中发现，高浓度吐温 8o抑制菌体的生长，脂肪酶表观生产率随着吐温一8o浓度的提高而降低 ]．这是 由于吐温一 8o的分解产物油酸阻遏脂肪酶的产生 ]．为了克服高浓度发酵底物吐温 8o对菌体生长的 收稿 日期 ：1998—03—02；恪订 日期 ：1999—04—26 基金项 目：国家 “九五”攻关项 目(96一C03—02—02) 作者简介；胨守文 (1968年 3月生)，男，湖北大冶人 ，工学博士，华 中农业大学副教授．