BCG及BCG提取物对小鼠膀胱癌的治疗及机制的研究.pdfVIP

中文摘要 有效的方法，但存在较多的局部和全身副反应，大多数患者 出现膀胱炎症状，包括尿频、尿急、尿痛、排尿困难，偶有 血尿。此外，还会出现尿道及膀胱肉芽肿等。全身症状如高 热、不适和一过性流感样症状亦常见。5％的患者发生严重副 反应，常与明显的BCG脓毒病有关，目前已有报道7例患 者死于膀胱灌注引起的BCG脓毒病。临床上有的患者常因 并发症而不能完成整个治疗疗程。因此，寻找一种具有BCG 生物活性而又没有其所带来的副反应的物质来治疗膀胱癌， 是当前临床亟待解决的问题。 的抗小鼠膀胱癌的治疗作用进行分析，旨在寻求治疗膀胱癌 的更佳药物，这对膀胱癌的治疗有重要意义。 目的：膀胱移行细胞癌是泌尿系统最常见的肿瘤，其 复发率高一直是困扰临床医生的严重问题，因此，寻找一 种有效的药物来控制肿瘤生长，降低复发率对膀胱癌的治 疗至关重要。BCG被认为是目前治疗膀胱癌的最有效的药 物，但存在许多不良反应。A985B是BCG的重要成分之一， 是分枝杆菌最主要的分泌蛋白，能够诱导机体强烈的Thl 免疫反应，并在分枝杆菌细胞壁合成中发挥重要作用，还具 有与纤维粘连素相结合的特性。该蛋白能够诱导Thl型免 疫细胞分泌IL乏、TNF．a和INF—y等细胞因子。本实验通 过检测BCG及其相关成分对免疫细胞产生各种细胞因子 的作用，观察抑瘤率和荷瘤小鼠生存期，分析肿瘤细胞坏 行细胞癌作用效果及机制作初步探讨，旨在为寻求对膀胱 癌治疗的更佳药物提供一定的依据。 中文摘要 材料与方法 1小鼠可移植性膀胱细胞癌动物模型的建立 1．1BTT739膀胱移行细胞癌株由上海市第一人民医院病理 科提供，常规培养传代分瓶，培养至对数生长期。T739小 鼠由中国医学科学院肿瘤研究所提供，由河北医科大学实 验动物中心饲养。 1．2 机平均分为四大组，雌雄各半。每大组平均分为两小组， 雌雄各半。每只小鼠右侧腋下皮下注射浓度为5．0×106／ml 的BTT7390．Iml。 2药物干预膀胱移行细胞癌的生长各组小鼠分别于接种膀 胱癌细胞的第l天、第5天、第9天、第13天和第17天 分别在肿瘤结节周围注射生理盐水、BCG、BCGE2及 A985B。生理盐水组作为对照组，其他组作为治疗组。第 18天每大组随机处死I小组，处死组取血离心分离血清并 解剖瘤组织称重，根据瘤重计算抑瘤率：抑瘤率(％)=(1． 治疗组平均瘤重／生理盐水组平均瘤重)x100％。瘤组织分 3部分。分别行病理检查、电镜和流式细胞分析。另l小组 观察荷瘤鼠观察生存期，并计算存活延长率。存活延长率 (％)=(治疗组平均存活天数／生理盐水组平均存活天数．1) xlOO％。 IFNcy浓度 3．1检测各组小鼠的几．2的浓度按照EIA试剂盒使用说明 建立标准曲线。于48孔培养板中，每孔加入待检样品100山 中文摘要 混匀，放置37℃120分钟，洗板后加入第一抗体工作液50ttl， 分钟，洗板加入底物工作液lOOttl，置37℃暗处10分钟后 加入1滴终止液混匀，492nm处测吸光值。根据吸光值在 标准曲线上查出相应IL．2的含量。 4流式细胞术检测 4．1检测肿瘤细胞的增殖将经70％酒精固定的膀胱移行细 胞癌组织制成单细胞悬液。用溴化乙锭(EB)染液进行DNA 定量荧光染色，流式细胞术进行分析。应用DNA细胞周期 分析软件，计算DNA组方图Go”S、G2M的百分比，以 index，PI)表示细胞的增殖活 细胞增殖指数(proliferation 4．2检测细胞凋亡情况(凋亡百分比)各细胞样品经染色 过滤后，单细胞悬液用流式细胞仪检测。 5光镜及透射电镜下观察各组肿瘤细胞的坏死及凋亡情况 结果 1．1处死小鼠解剖瘤组织称重，生理盐水组、BCG组、BCGF丑 4-1．05)g。 盐水组荷瘤小鼠平均瘤重明显高于其余三组，差别有显著 性；a985B处理组荷瘤小鼠平均瘤重明显低于其它两组，其 差别有显著性。其余两组之间无差别。 中文摘要 天和30．25士5．43天。生理盐水组荷瘤小鼠平均生存期明显低 于其余三组，差别有显著性；其余三组中A985B组明显长于 其