地衣芽孢杆菌ZJU12所产细菌素的分离纯化及其理化性质和基因克隆的研究.pdfVIP

摘要 逸衣芽豫秆蘸ZJUl2觚土壤中分离岛来，能产生缅菌索，对多种革兰氏阳 性绷菌和檬物病原真菌有撼抗{乍用，但是对除水稻自叶植病原菌以外的革兰氏 阴性细菌没有拮抗作用。地衣芽孢杆菌ZJUl2所产细菌素对蛋白酶K和胰蛋白 酶敏感。经100。C30分镑居仍具鸯培撬活槛，121℃15分镄蜃完全失活。璇友 芽獭杆菌ZJUl2的去菌液猩pH-9内具有拮抗活性，其中最适pH值在6．5左 75 右。缨藿蝰游去蓥滚经65％璇酸铵浚淀、DEAE一52离子交换色谱、Superdex MHENVEEYLPIvIN，QPATEYLYNTDYLLPLLVDTY的三段肽链。经查询，没 有发现与已如序列的同源憔eqCBD。纯化鹘抗菌物膜也进行了N端测序，但没 有德到氨基酸序列。她衣芽孢抒菌ZJUl2的接抗趣提物最瀛在O。89／209的裁量 时对实验小鼠没有急性毒性。 微球菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌的抑菌作用，发现黄色微球菌比其他 两狳籀示蓠对毳酸链球萤豢帮去麓滚蔓热壤感，装现鑫燮低匏最小麴莹滚度 值。用棋盘稀释法和杀菌时间法测定发现nisin和CFSb具有协同作用。从部分抑 抑蔚{乍用。nisin和CFSb在30分钟内戴表现鹤杀菌作用，丽它们的协同杀菌作月 在44,时后才表现出来。 琢Superdex75凝跤过滤色谱豹筹二蜂尖嫂集滚免疫瑟嚣兰大渔兔获鼹多 克隰抗体。用斑点酶联免疫吸附试验法和目标抗原的拮抗作用法对抗原抗体反 应静敏感毪避学了分爨，臻袋表鞠发凌菇羲佟爨法比斑点ELISA其有更好静灵 敏{生。拮抗作用法只需抗原100AU／ml，抗体1：8000就能检测到抗体抗原反 ZJUl2没有发现质粒的存在。通过用拮抗活性法和抗体探针法筛选cDNA文库 得到两个包含细菌素疑似基因的阳性克隆。另外，发现地衣芽孢杆菌ZJUl2和 乳酸链球茸之翘没有档互撼抗作用，通过聚合酶链斌反应法国cR)以NTsl鄂分 序列为引物从地农芽孢杆菌ZJUl2扩增到一条大小约1．5kb的NisI疑似基因。 关键词 缝衣芽孢秆菌ZJUl2，细菌素，理彳毛性质，缝纯，巍酸链球菌素，协同作餍麓 因克隆 2 A_BSTRACT WaS from Bacillus isolated soil，could licheniformis7JUl2，which produce that a of bacteriocin—like exhibitedbroad peptides spectrumantagonisticactivity various of bacteriaand not against speciesGram—positive fungalpathogens，but bacteriatested Xanthomonas rice oryzae againstGram-negative except pv．oryzae，a were to Kand bacteriocinssensitive trypsin．Theactivity pathogen．The proteinase yeas