Bacillus+sp.16A苎麻脱胶机制初步的研究及其关键酶的纯化.pdf

摘要 与热碱蒸煮的化学脱胶工艺相比，生物脱胶技术具有很大的优越性和良好的 应用前景。日前的技术难点是如何迸一步降低脱胶后纤维的残胶率：一味增加脱 胶关键酶一一果胶酶并不能持续增强脱胶效果；人们对半纤维素酶在脱胶中的作 用存在分歧。本论文的目的就是研究后者是否对果胶酶有脱胶增效作用。 从实验室保存的脱胶菌中筛选出一株苎麻脱胶能力强的菌株Bacillus sp． 16A，同比于其它相关报道，经该菌株脱胶的苎麻残胶率在14％以下，两且在铀 内即可完成脱胶， 证明它是一个高效脱胶菌株． Bacillus MicrobialIdentification sp．16A经16s rDNA序列比对和Biolog System鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillusaubtilis)．胞外酶系分析显示，Bacillus subtilis 16A能够分泌高活性的聚半乳糖醛酸酶和少量的半纤维素酶，不产生纤维 素酶。在其高效脱胶的同时并不会损伤纤维，是苎麻脱胶的优良菌株。 subtilis 利用丙酮分级沉淀的方法，将Bacillus16A发酵液中的果胶酶和甘露 聚糖酶处理成不同活性比例的3组脱胶酶液。分别进行苎麻脱胶后分析了纤维的 一些特征，包括；手感柔软程度，纤维分散程度、果胶残留，失重率、纤维细度 及扫描电镜图。通过比较发现，甘露聚糖酶对果胶酶的脱胶效果有一定的协同作 用，前者能增强后者的脱胶效果。这给进一步研究苎麻脱胶指明了方向：为了进 一步提高脱胶效果，应该把工作重心放在提商半纤维素酶的活性上来． 、 最后，为进一步深入研究苎麻的脱胶机制作准备，纯化了脱胶关键因子—— Fast Flow阳离子交换桂层析、 果胶酶。粗酶液经预冷丙酮沉淀、CM-Sepharose G．75凝胶过滤层析后，经SDS不连续电泳检测为 真空冷冻干燥、Sephadex 单一条带，分子量为30．2kD。总共被浓缩了21．8倍，回收率17．7％。基本性质分 失活；最适作用温度为50C，在55C时稳定，60C时易失活；c a：2+、Mf+是该 酶的激活剂，其中Ca2+对该酶有强激活作用，cu”，Mn2+，cd斗、H92+是抑制剂， 其中H毋+对该酶的抑制作用最大；酶解产物在235rtm处有强吸收峰。说明该酶是 聚半乳糖醛酸裂解酶。且只具有裂解聚半乳糖醛酸的能力。 subtilis 关键词：苎麻；生物脱胶；Bacillus 16A：果胶酶；甘露聚糖酶；纯化 ABSTPACT ， technics withhotalkali withthechemical ofboiling solution， Comparing degumming a ismore andhasbright present， advancing applicationprospect．At biodegumming reduce thetechnical liesinhowtofurther theresidual