降血糖蛋白E2HSA体外活性和体内药代动力学及研究.pdf

降血糖蛋白E2I-ISA的体外活性和体内药代动力学研究 研究生：宋佃卫 专业：药理学 导师：王德才教授 夹任万狄仅窦桂芳教授 中文摘要 目的： 研究多肽类降血糖药物E2HSA的体外活性和动物体内药代动力学特点。 方法： 量来反映其体外生物活性：建立化学发光酶联免疫检测法(CLEIA)澳iJ定猕猴血清中 在猕猴体内的药代动力学特征；采用硫酸铵盐沉淀法结合CLEIA研究E2HSA在猕猴 体内的代谢转化和活性形式研究。 结果和结论： ， 肽．1(GLP一1)受体结合，孵育一段时间后，用细胞裂解液将细胞裂解，释放出第二 信使cAMP，用自主研发的免疫试剂盒测定细胞裂解释放出的cAMP含量。随着受体 度增加到一定程度时，细胞产生的cAMP量达到一个平台期，可能是由于药物和细胞 了其亲和力。 的含量，在E2HSA浓度2—500 ng·mL。1范围内与其它类型白蛋白无明显交叉反应， 最低定量下限为2 0／0-7．2％，板间 rig·niL1，具有良好的线性关系。板内精密度为2．5 l 质控浓度的血清样品在．80℃冻存6天稳定，精密度为3．2％～7．9％，准确度为．3．7％ l一100 ng·mL1，具有良好的线性关系。板内精密度和 ng·mLl，最低定量下限为100 E2HSA和Exendin．-4的临床前药代动力学研究要求。 ． 3．猕猴单次皮下注射O．3 mg·kfl(39．3x10‘10mol·l嘻1)E2HSA后，清除半衰期 是61．38h，AUCo．．0是9272．91ng．h·mE1，CL是32．15 不到血药浓度，E2HSA的半衰期明显延长。． 4．硫酸铵盐沉淀法结合CLEIA法可以检测E2HSA进入动物体内的代谢转化情 性更高的形式Exendin．-4发挥降血糖作用。 ． 关键词： E2HSA；Exendin--4；生物活性；CLEIA；药物代谢动力学 2 BIoACTn厂ITYINⅥTRoAND IN OF PROTEINE2HSA VIVOHYPOGLYCEMⅡC Graduate Dianwei student：Song Speciality：Pharmacology Decai Supervisor：Prof．Wang Prof．Dou Adjunct Guifang ABSTRACT objective： ThisthesisWills t0 the invitroand invivo designedstudybioactivity pharmacokinetics of E2HSA． hypoglycemicprotein Methods： The ofcAMPconcentrationinRINm-5Fcellscallreflectthevitro