松科10属植物叶子内皮层具有凯氏带的新证据.pdfVIP

维普资讯 第 23卷 第 5期 电 子 显 微 学 报 Vo1．23．No．5 2004年 l0月 JournalofChineseElectronMicroscopySociety 2OO4．10 文章编号：1000．6281(2004)05-560—06 松科 1O属植物叶子内皮层具有凯氏带的新证据 唐 熙 一，吴小琴 ，吕洪飞 ，林金星 卜 (1中国科学院植物研究所，北京 100093；2福建教育学院，福建 福州350001) 摘 要：本文应用荧光显微技术，结合检测凯氏带的特异染料小檗碱和 甲苯胺蓝对染方法，对松科 l0属 l3种植物 叶子的冰冻切片进行 了观察，确认在松科的 l0属植物叶子中均有内皮层凯氏带加厚，纠正了前人关于在松科植物 某些属的叶子中不存在凯氏带的结论。根据 内皮层细胞排列模式和凯氏带加厚程度，我们将松科的 l0属分成两 大类。通过酶解分离我们得到典型的凯氏带网状结构，说明其能够抵御酶解，其原 因可能是成份含木质素和木栓 质 。 关键词：松科 ；叶子；内皮层；凯氏带；荧光显微镜 ；酶解技术 中图分类号i949．66 5；Q945；Q336 文献标识码iA 内皮层是指包围在根部维管束和与之相连的薄 京中国科学院植物研究所植物园内，并用FAA固定 壁细胞外面的一层鞘细胞。在其细胞的径向壁和横 保存；其余9种取 自中国科学院植物研究所生殖室 向壁上 ，通常具有木质化和栓质化的带状结构—— 已经固定的材料(见表 1)。 凯氏带加厚。土壤水分进入根部通常有三种途径， 1．2 方法 即离质体途径、共质体途径和跨细胞途径，凯氏带被 1．2．1 组织切片及荧光显微镜 认为是水分从根部表皮细胞进入 中柱 的重要 障 取每种松科植物的三片叶子用蒸馏水洗净后， 碍…。根部内皮层具有凯氏带是维管植物的重要特 从叶子中部切取 20—30mm的长度，置于冰冻切片 征，而其他器官中是否具有凯氏带一直存在着争论 。 机中一30℃快速冷冻后进行冷冻切片，厚度为20— 特别是对于裸子植物叶子内皮层是否具有凯氏带更 25ttm，在解剖镜下挑选透明、均匀、完整的切片，置 是存在不同的看法 ，至于这个特征能否作为松科 于染料小檗碱．甲苯胺蓝中进行双重染色 ，最后在 的分类特征则缺乏系统的研究。由于凯氏带与内皮 紫外光激发波长为 365nm的荧光显微镜 (Axioskop 层细胞质膜紧密相连，因而分离凯氏带十分困难。致 40型)下观察并照相。 使凯氏带的研究进展缓慢。近年来 ，Brundrett等 】 1．2．2 酶解纯化细胞壁 采用小檗碱和甲苯胺蓝染色技术，在根部内皮层凯 取2—3年生的供试植物叶子洗净。切成0．5cm 氏带 的标记 上 获得 了理想 的结果；Karahara和 左右的小段，水煮数分钟后，用刀片将针叶表皮及表 Shibaoka用纤维素酶和果胶酶的酶解方法。成功地 面角质层刮除干净，再放人含 5％果胶酶和 5％纤维 分离得到了根部凯氏带的网状结构¨，这些技术的 素酶的0．01mol／L柠檬酸缓冲液中，调节pH至3．0。 改进为凯氏带的研究奠定了基础。本文应用荧光显 置室温下酶解，每隔3—5天更换酶液一次 ；2周 微技术，结合小檗碱和甲苯胺蓝对染技术系统地对 后在解剖镜下将具网状结构的凯氏带与维管组织以 松科 10属 13种植物的叶子进行了比较观察，旨在 及外部的其它组织分离，再经去离子水清洗数遍。在 研究松科各属叶中是否都有凯氏带，并进一步说明 去离子水中保存备用。观察时。用染料小檗碱．甲苯 这个特征的生理学意义。 胺蓝进行双重染色，在紫外激发的荧光显微镜下观