固定化金属离子合琼脂糖凝胶的制备及其纯化组氨酸标签蛋白的研究.pdfVIP

硕士论文 固定化金属离子螯合琼脂糖凝胶的制备及其纯化组氨酸标签蛋白的研究 摘 要 固定化金属离子亲和层析是一种纯化蛋白的优良方法。其中，固定化金属离子螯合 琼脂糖凝胶纯化组氨酸蛋白的技术，近年来备受关注。这种方法主要利用共价作用固定 在微球表面的配基与金属离子形成螫合物，蛋白质通过其表面基团与螯合物的配位作用 达到纯化蛋白的目的。具体研究内容如下： 1．以琼脂糖凝胶(SepharoseCL．6B)作为载体，环氧氯丙烷为活化剂，分别以亚氨基 发生改变，这说明琼脂糖微球在活化过程中粒子没有发生变形或破碎。并且探索了镍离 子亲和层析介质的影响因素，研究发现：当环氧氯丙烷与基质的体积比为O．5，亚氨基 二乙酸与基质的体积比为2，反应时间1h时，琼脂糖的活化效率最高。 质，纯化后目标蛋白几乎没有杂质，蛋白经过一次提纯就可得到纯度高的靶向蛋白。 3．合成螯合配基．N．(5．氨基．1．羧戊基)．亚氨基二乙酸，通过红外光谱和核磁谱等方 法确定了产物的结构，采用N．(5．氨基．1．羧戊基)．亚氨基二乙酸作为螯合配基来纯化蛋 白质的实验还有待进一步研究。 · 关键词：金属螯合层析；琼脂糖凝胶；蛋白质纯化 Abstract 硕士论文 Abstract ImmobilizedmetalIon isa forthe of affinitychromatographygoodway purification metalionchelate new them，immobilized CL-6B，atechnology protein．Among Sepharose attentionin whichisusedforthe of attractedmuch purificationHis,-Taggedprotein，has recent method uses whicharefixedonthesurfaceof years．The mainly ligands metaliontoformchelate covalent the by interaction,then microspheres，chelating compound attach、析mchelate the onthesurfaceof coordination ligands protein compoundthrough effectbetweenthem．The researchcontentsareasfollows： specific 1．Twochelate and affinitychromatographic are asthecartier,