《NLRP3炎性复合体表达水平与小鼠异基因造血干细胞移植肝损伤的关系研究.》.pdf

·684· 虫堡血液星杂壶2014年8月第35卷第8期 ChinJHemat01，Auflust2014，Vo1．35．No．8 · 论 著 · NLRP3炎性复合体表达水平与小鼠异基因 造血干细胞移植肝损伤的关系研究 黄玉金 付金玉 吴进燕 房婷 化静 刘迷迷 郭娜 徐开林 曾令宇 摘【要】 目的 探索NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性复合体表达与小鼠异基因造血干细胞移植 (allo．HSCT)肝损伤的关系。方法 建立allo—HSCT小鼠模型，流式细胞术检测受鼠骨髓嵌合率；通过 HE染色、免疫组化染色及Masson染色观察肝组织病理形态，通过病理损伤评分评价肝损伤程度；用 Westernblot法检测肝脏组织炎性细胞及NLRP3炎性复合体表达水平；用实时荧光定量PCR法检测肝 组织NLRP3炎性复合体组分相关基因及细胞因子IL一1B、IL．18mRNA表达水平。结果 allo—HSCT后 第10天(+10d)，供鼠造血干细胞基本上完全植入，嵌合率大于97％，同时肝脏病理形态显示有肝损 伤，+15d肝损伤最重 ，随后逐渐减轻 ；在肝损伤过程中伴有IL．1B、IL．18mRNA表达水平增高，+15d 时二者表达量分别为正常组的 (1．19~0．40)倍和 (1．64i0．76)倍 ；在肝损伤最严重时伴有caspase—l mRNA表达水平增高，为正常组的(3．51~0．46)倍；移植后肝组织细胞NLRP1、NLRP3、NLRC4、NLRP5 mRNA均有一定程度的表达，其中NLRP3表达水平最高，其mRNA及蛋 白表达水平与肝损伤程度同 步 ，+15d时mRNA表达量为正常组的(2．91~0．41)倍 。结论 NLRP3在allo—HSCT小鼠表达水平明显 增高，可能为移植后肝脏炎症性损伤的因素之一。 【关键词】造血干细胞移植； 肝脏损伤；细胞因子；基因，NLRP3 The relationship between NLRP3 inflammsomes expression and liver damage after allogeneic hematopoietiestemcelltransplantationinmicemodel HuangYujin，FuJinyu,WuJinyan，FangEng, HuaJing,LiuMimi．GuoNn． Kailin．ZengLingyu．DepartmentofHepatology,AffiliatedHospitalof XuzhouMedicalCollege，Xuzhou 221002，China Correspondingauthor．ZengLingyu，Email：zengly2000@163．com A【bstract】 Objective Toexplorethefunctionofnucleotide-bindingdomain(NOD)一likereceptor protein3(NLRP3)inflammsomesinliverdamageafterallogeneichematopoieticstem cel1transplantation (allo—HSCT)．MethodsThestudypresentedamurine(BALB／c．based)mode1ofallo—HSCTChimerarate wasmeasuredbyflow cytometry．Thehematoxylin．eosin．Masson’strichrome．immunohistochemistry stainingwereusedtoobservethepathologychangesinliver，thenmeasuredhtedegreeofliverdamage． InflammationcellsandNLRP3weremeasuredbyWestem blot，cytokinesIL．1B，IL．18andNLRP3related genesweretestedwithrea1．timequantitativepolymerasechainreaction (a．PCR)．Results Hematopoietic stem cellshadbeensuccessfullytransplanted．thechimera