《p38介导β-羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响.》.pdf

中国兽 医学报 2013年12月 第33卷 第12期 Chin，‘VetSci Dec． 2013 Vo1．33 N。．12 1889 p38介导 一羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响 宋玉祥 ，李 玉，李心慰 ，史晓霞，丁红研，韩盈盈 ，李 娜，张仁和，张玉明， 王婷婷 ，殷 立恒 ，郭 立辉 ， 李小兵 ，王 哲 ，刘 国文 (吉林大学 动物医学学院，吉林 长春 130O62) 摘要 ：本试验 旨在探讨 B一羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及 p38MAPK在其 中的调控作 用。选择培养 72h的肝细胞 ，添加不 同浓度的BHBA(0、0．6、1．2、2．4mmol／I)，培养 9h，每个浓度 3个重复。另外 选取细胞 ，p38MAPK抑制 剂 SB2O3580(10ffmol／L)预 处理 1h后 ，添加 BHBA，使 其终浓度 为 2．4mmol／L；PI／An— nexinV—FITC双染 ，运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况 ；ELISA法检测 p38的活性 ；实时荧光定量 PCR方法检测 p38、Caspase一3、Caspase9、bcl2基 因的mRNA表达水平。结果表 明，与对照组相 比，1．2和2．4mmol／IBHBA组的 肝细胞凋亡明显增加 ；p38酶 活性 明显升 高；p38、caspase一3和 caspase一9基 因mRNA表达水平均显著增加 (P 0．01)，bcl2基 因mRNA表达水平显著降低 (PO．05)；添加 p38抑制剂后 ，caspase一3和 caspase9基 因mRNA表达 水平显著降低(P％0．01)，bcl一2基因mRNA表达水平显著增加(P％0．05)。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培 养犊牛肝细胞凋亡 ，p38在 BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。 关键词 ：BHBA；p38；凋亡基 因；肝 细胞 ；犊牛 中图分类号 ：$858．23 文献标志码 ：A 文章编号 ：1005—4545(2013)12-188907 B-hydr0xybutyrate inducethe apoptosisofprimary cultured bovine hepatocytes mediatedbyp38 SONG Yu—xiang，LIYu，LIXinwei，SHIXiao—xia，DING Hong—yan，HAN Ying—ying，LINa，ZHANG Ren—he，ZHANG Yu—ming，W ANG Ting ting，YIN Liheng，GUO Lihui，LIXiao—bind，W ANG Zhe， LIU Guo—wen (CollegeofVeterinaryMedicine，JilinUniversity。Changchun130062。China) Abstract：Theobjectl。veofthisstudywastoinvestigatetheeffectof7-hydroxybutyrate(BHBA)on theapoptosisofprimaryculturedbovinehepatocytesandtheimportantroleofp38intheBHBA～ inducedapoptosis．Afterhepatocyteswereculturedfor72h，differentconcentrationsofBHBA (0， 0．6，1．2，2．4mmol／L)wereaddedwiththreereplicationsinonegroupandculturedforanother 9h．Hepatocyteswerepretreatedwithp38inhibitorSB203580(10~／mol／L)for1h，thenBHBA wereaddedinthefinalconcentrationof2．4mmol／L．Apoptosisofhepatocyteswasobservedbv fluorescencemicroscopyafterstainedwithPI／AnnexinV—FITC．Theenzymeactivityofp38was detectedbyavailablep38activitykitsatth