第讲DNA体外重组与转化宿主细胞及其筛选与检测.ppt

荷兰植物生物技术公司将编码大肠杆菌海藻糖-6-磷酸合成酶和海藻糖-6-磷酸酯酶的编码基因otsA和otsB基因克隆，构建成一个操纵子otsBA，将其导入甜菜、马铃薯中，增加了甜菜和马铃薯中海藻糖的含量，同时增强了转基因植株的抗旱性和抗寒性。 3、甜菜碱合成相关基因 CMO：胆碱单加氧酶 CDH：胆碱脱氢酶 BADH：甜菜碱醛脱氢酶 COD：胆碱氧化酶 在0%、0.3%、0.6%NaCl胁迫下，转BADH基因马铃薯的生长状况 非转基因植株 转基因植株 液体培养法诱导的马铃薯Favorita的试管薯 （五）提高作物产量的基因及其应用 1、植物光合作用机制 C3和C4植物固定CO2的差别和产量差异 C3 C4 C同化的酶 Rubisisco PEPCase 及其特点 RUBP+CO2 3-PG 对CO2的亲和力 RUBP+O2 磷酸乙醇酸 强，能固定低 （光呼吸） 浓度的CO2 光合效率 较低 较高 作物产量 较低 较高 2、提高作物产量的设想和策略 （1）向C3植物导入C4植物中的PEPCase基因，提高其固定CO2的能力。 （2）提高Rubisisco的羧化活性。 3、作物改良的试验研究概况 1988年Tagu等将高粱的PEPCase的cDNA导入矮牵牛的原生质体中，并成功的诱导出愈伤组织和分化出再生植株。 焦德茂等2004年报道，成功地将玉米的pepc导入水稻，获得4个具有高光效特性的水稻新株系，其中一个小面积产量比对照提高了20％左右。 对于提高Rubisisco的羧化活性的研究： 该途径难度比较大，因为Rubisisco是560kDa的蛋白质复合体，由8个大亚基和8个小亚基组成。在Rubisisco基因工程中，不仅要考虑大、小亚基的装配问题，还要考虑构建基因对酶复合体的影响。 （六）控制果实成熟期的基因及其应用 1、调控果实成熟的意义： 番茄、香蕉、苹果、葡萄、草莓、菠萝、荔枝、龙眼等在贮藏和运输过程中，由于成熟过程迅速，很难控制，常导致过熟、腐烂，或货架期较短，影响销售，造成巨大经济损失。 2、控制果实成熟、延长保鲜期的方法 常规做法：降低温度、增加CO2等控制呼吸作用以延缓成熟。 但是存在阻止成熟的效果不太令人满意、成本高、储存规模不大的缺点。 3、果实成熟与呼吸跃变及乙烯的关系 内源乙烯生成超过某阀值是果实发生跃变的前提，该值约为0.1-1.0mg/kg。 跃变型果实在成熟时发生一系列成分的急速变化： 多糖水解、细胞壁结构物质如果胶的水解、有机酸变化、香气增加、乙烯生成量升高、涩味消失、色泽发生变化等。 此外，由于果实组织、硬度下降，容易感染病害。 充分成熟的香蕉更香甜 香蕉黑星病 植物体内乙烯生物合成的途径 ACC合成酶 乙烯形成酶 甲硫氨酸 S-腺苷甲硫氨酸 ACC 乙烯 （SAM） ACC：1-氨基环丙烷-羧酸（aminocyclopropane carboxylic acid） 问题：如何控制乙烯的合成？ 4、利用反义技术控制果实的成熟 5、控制果实成熟的基因及其应用 （1） ACC合成酶反义基因及其应用 ACC合成酶是乙烯合成过程中的关键酶，至今已从苹果、番茄、香蕉等多种植物中克隆了ACC合成酶基因。 番茄果实成熟期间表达2种ACC合成酶，编码基因分别是LE-ACC2和LE-ACC4，其中LE