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摘要……………………………………………………………………………1
Abstract．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．3
引言……………………………………………………………………………………………5
第一章研究背景和意义…………………………………………………………………………9
1．1
TLRs………．…………………………………………………………………．…………………………………………10
1．2
CLRs………………………………………………………………………………………………．……………………．13
1．3
RLRs．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．…．．．．．．．．．．．．…．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．…．…14
1．4
NLRs．…．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．…．．．．．…．．．．．…．．．．…．．．．．…．．．．…．．．．．…．．．．…．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．17
1．4．1
NLRP3炎症小体……………………………………………………………………．．19
1．4．2
NLRPl炎症小体………………………………………………………………………22
1．4．3
PYHIN炎症小体………………………………………………………………………24
1．4．4
1．4．5
NLRC4炎症小体………………………………………………………………………25
1．4．6
1．4．7其它NLR蛋白的功能………………………………………………………………．33
第二章研究对象和研究思路…………………………………………………………………．35
第三章实验材料和方法………………………………………………………………………．36
3．1材料和方法………………………………………………………………………………36
3．1．1材料：实验中所用基因、抗体、菌株、试剂、小鼠及细胞系来源……………．36
3．1．2表达载体的构建……………………………………………………………………．41
3．2细胞培养及转染、基因敲低操作………………………………………………………47
3．2．1细胞培养……………………………………………………………………………．47
3．2．2细胞转染操作………………………………………………………………………．47
3．2．4蛋白转运……………………………………………………………………………．48
3．3免疫印迹和免疫共沉淀…………………………………………………………………．48
3．3．1本实验中用到的各种溶液…………………………………………………………．48
blotl……………………………………………………………．49
3．3．2免疫印迹(Western
3_3．3免疫共沉淀…………………………………………………………………………．50
3．4细菌中重组融合蛋白的表达和纯化……………………………………………………51
3．4．1本实验中用到的溶液………………………………………………………………．51
3．4．2
His融合蛋白的纯化及LPS的去除…………………………………………………．52
3．4．3Protective
Antigen(PA)的纯化………………………………………………………．53
3．5．1细胞死亡测定………………………………………………………………………．54
3．6酵母双杂交实验…………………………………………………………………………54
3．6．1实验中所用各种培养基的配制……………………………………………………．．54
3．6．2
LiAc一介导的酵母转化………………………………………………………………．．55
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