PhyA基因的克隆及其大豆遗传转化研究.pdf

“J{人’?坝I‘卜、Il，(一’?+位)l台业 摘 要： J}lI【簸嗍一，J以将植酸降解为单磷酸肌孵删A二机磷酸来淌“植物埘磷酸的j^刊tJi…J【＆ 324¨J rL分泌 PhyA喇{|Ii峻眦。术史从无花果曲霉中范降r pBin438一Ph}A，』tj以转化大豆品种吉林35_j{：li．筛选出了{庀‘陀三j‘． f DNA＼：pI}州j{根抛此序列设计引物。Jij没i}的PhyA基l 8．T pMDleasy I切出PhyA，纯化后用于后续试验。 I和Sal I双酶切，纯化后连接转化大肠柑菌 表达载体pBin438、pUCl8用BamH JMl03。提取重组质粒以EcoRI酶切，回收，用Klenow Fragment将末端补平。再用 I酶切，回收14kb的片断并纯化。 Sph 杂交法将pBin438一PhyA导入根瘤农杆菌LBA4404。 大豆种子经表面消毒后，于无菌MS培养基中发芽3—4天。耿其子叶节或一FIN轴 切段接种到含1mg／L 菌，继续培养。再用抗生素筛选转化细胞，然后转入分化培养基中分化出抗性小芽。y一 ， 本文克隆了无花果曲霉植酸酶并构建了高效植物表达载体，进行了大豆转化并分 化出抗性芽，为转植酸酶大豆的研究奠定了基础。 关键词：尤花果面≤ 植i；影 克隆 表达；麦衫三亲寨≤ 农柯彳 大豆(吉林35)组织培莠7 V Abstract tasecall to and f’h3 decomposephytatemyo—inositol release monophosphate inorganic reduce can soll resultedthe phosphorus．thus polItitiOn from existenceofoverabundant i11 strainAS3 324sccrgtesandthe issuitableto phytatesotl．4spergillm，?(·Cltl?l PhyA PhyA beusedin researchInthisarticle、~eclonedtile from es transgene PhyAgene Asl)er2,ilh ，j“‘llHland a efficient vector constructed totransforn] highly plante