siRNA抑制ZNF139对人胃癌裸鼠原位移植瘤增殖影响研究.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 前言……………………………………………………………………9日U舌…………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………9 结果……………………………………………………………………2l 附图……………………………………………………………………24 附表……………………………………………………………………29 讨论……………………………………………………………………33 结论……………………………………………………………………37 参考文献………………………………………………………………38 综述基因治疗在肿瘤增殖中的应用……………………………………40 致谢…………………………………………………………………………49 个人简历……………………………………………………………………50 中文摘要 摘 要 目的：胃癌是世界范围内最常见的消化道肿瘤之一，其具有发病率高、 死亡率高、早期诊断率低、晚期治疗效果差的特点，2008年全球的胃癌新 发病例将近100万，近74万人死于胃癌，严重威胁人类的生命健康[11，我 国是胃癌发病率及死亡率最高的国家之一，目前对于胃癌治疗以手术为 主，化疗为辅，但由于大多数胃癌发现时已经处于中晚期，只能行保守治 疗，但胃癌对于化疗敏感性低、耐药性高，所以效果不佳，进展期胃癌的 一步发展，人们对于胃癌的发病机制有了更深一步的认识，胃癌是一个多 步骤、多阶段、多因素参与的疾病，在正常的细胞组织生长过程中，由于 上述原因都有可能导致细胞增殖的失调，最终导致胃癌的发生。如果在这 个过程中，我们干预某些基因的表达，将会对于胃癌的预后起着积极的作 用。近年来，锌指蛋白在肿瘤中的作用受到了广泛的关注。Krfippel家族 锌指蛋白是锌指类转录因子中的一类，其能通过调控相关基因的转录和表 达，来影响肿瘤的发生与进展。例如：在骨肉瘤的组织中ZNFl33呈高表 达，可作为骨肉瘤发病过程中特异性的蛋白标志物【2】。ZNFl39是锌指蛋 建立的胃癌原位移植裸鼠肿瘤为研究对象，观察沉默转录因子ZNFl39后 对于肿瘤增殖的影响并对其机制进行讨论。 方法： 为介导，将其按不同浓度转染入体外培养的人胃癌SGC7901细胞中，用 qRT-PCR检测其抑制效率。 2收集对数期生长的人胃癌SGC7901细胞，配置成细胞悬液后进行 裸鼠皮下注射，待皮下瘤体直径为1．5cm时，取胃癌组织块lmm3，接种 到下一只裸鼠的皮下，进行鼠间传代，以相同方法传代5次后取出移植瘤， 剪成lmm3大小组织块进行胃壁浆膜下原位移植，制备胃癌原位移植裸鼠 中文摘要 肿瘤模型。 为介导，转染进入裸鼠肿瘤内，同时设置阴性对照组(转染空质粒组，以 下简称阴性组)和空白对照组(注射生理盐水组，以下简称空白组)，转 染作用合适的时间后处死裸鼠，取出瘤体备用。 4以机械法将三组不同处理因素的瘤体制备成悬浮细胞，进行原代培 养，应用MTT法检测0、24、48、72小时细胞的增殖情况。 5转染48小时候，将瘤块以70％酒精固定，用机械法将瘤块制备成 悬浮细胞，运用流式细胞术比较三组细胞周期的变化并计算其增殖指数。 DmRNA在三组中 6应用RT-PCR技术检测ZNFl39、PCNA、Cyclin 的表达情况 结果： mRNA相对表达量 1．O“∥山重组质粒转染后的SGC7901细胞中ZNFl39 组抑制效率最高，为85．58％。 2MTT实验结果显示：于0小时的实验组、阴性组、空白组的OD值分别 性组和空白组(PO．05)，阴性组和对照组之间无明显差异(PO．05)。 3流式细胞术结果显示：末次转染注射后48小时，实验组、阴性组、空 36．00士O．53，实验组、阴性组