α—半乳糖苷酶发酵工艺、分离纯化及应用的研究.pdf

堑丛厶堂遭土堂位迨塞 主堑擅受 中文摘要 o【一半乳糖苷酶(O,-galactosidase，EC 主要为棉籽糖类寡糖，如：棉籽糖、水苏糖、蜜二糖和毛蕊花糖等。该酶在食品、饲料和 医药等领域中有着广泛的应用前景。本论文从c【一半乳糖苷酶高产菌种选育开始，研究了旺． 半乳糖苷酶发酵技术及工艺，对液体发酵产生的c【一半乳糖苷酶进行纯化，并对酶学性质及 酶促反应动力学进行了深入研究，验证了纯化后的0【一半乳糖苷酶对豆粕、棉籽粕和菜籽粕 中Q．半乳糖苷寡糖的水解作用，同时进行了单胃动物的饲养试验。论文的主要研究结果如 卜： h后的 (1)从发酵的酱醅中分离并筛选到一株高产0【一半乳糖苷酶的曲霉菌株，发酵96 酶活达到22．27 离子束辐照，突变株AspergiIlusfoetidus U／mL。 提高了20．7％和23．4％，培养96h后的酶活分别达到26．88U／mL和33．18 (2)为了确认该菌株产的Ⅱ一半乳糖苷酶能安全应用在食品和饲料工业，进行了小鼠急 性经口毒理试验，实验结果表明“．半乳糖苷酶粗酶液属于实际无毒类。 6．31。用此培 04．7U／ml。 养基发酵144h，“一半乳糖苷酶酶活达到1 250ml的三角瓶中装30ml培养基，接种量6．6％，18 h的种子培养液接种。 温度28℃，18 ml的三 h的种子培养液接种，接种量10％，pH6．0，纱布层数为6层，250 角瓶中装109干基的培养基。 利用单因素试验获得该菌株产0【一半乳糖苷酶的适宜培养基组分，豆粕、麸皮、 0．0019；faCuS04·5H20 达到2572．53 U／g。 (5)该菌株发酵液经过分级盐析、离子交换柱层析和分子筛柱层析，得到了电泳纯c【． 半乳糖苷酶，其中Ⅱ一gal1分子量为106．3 11分子量为49．7 111分子 KDa，Ⅱ．gal KDa，G【-gal V 逝些厶堂擅主翌位迨窒 虫室摘要 量为107．9 组分的最适作用pH不同，n—galI和d—gal 稳定性而言，cc_galI在pH 6．0 5．0的环境中最稳定(酶活保留 的环境中最稳定(酶活保留率达73．7％)，0【．gal111在pH 率达88．4％)。 (6)不同金属离子和糖类等对0【．半乳糖苷酶三组分酶活的影响是不同的：三组分均受 A矿强烈抑制，Cu2+对d—gal III酶活的影响 III有明显 不大，Mg”、Mn2+和Na+离子有激活作用。SDS对a一半乳糖苛酶a唱alI和d-gal 的抑制作用，而对q．gal