三个肝癌异常表达基因及其一个脑特异表达基因的克隆.pdf

中文摘要 摘 要 本文分三个部分，第一部分克隆了动力蛋白的轻链基因的两种亚型--DNLC2A 和DNLC2B，并分析了它们与肝癌的关系；第二部分分析了内质网膜蛋白RTN基 因与肝癌的关系：第三部分克隆了一个脑神经元特异表达基因并分析了该基因在 各脑区的表达情况。． 一． 肝癌是亚洲和非洲一些国家的常见恶性肿瘤之一。f越来越多的证据表 明，肝癌的发生除与慢性病毒性肝炎、肝硬化和黄曲霉毒素相关外，还与遗传物 质的改变有关，这些遗传改变包括原癌基因的扩增或激活、抑癌基因的失活或缺 失，某些生长因子的过量表达、端粒酶的活性增强和DNA错配修复能力的缺陷等。、 本文利用同源筛选策略，以果蝇roadbIock基因的eDNA为探针，在国际生物技 术信息中心的人EST数据库中，进行杂交步移，获得了一个动力蛋白的轻链基因 的两种亚型--NLC2A和DNLC2B，并进行了克隆和鉴定。 f 了测序验证，它们的序列全长分别为1028．bp和506-bp，都编码96个氨基酸残 0．9 0．8 基，推导蛋白的分子量分别为1 kDa和1kDa．。它们分属于哺乳类 蛋白轻链，从酵母、线虫、衣滴虫、果蝇、到哺乳类，都存在该基因家族，动力 蛋白在细胞分裂、胞内运输及轴突运输中起重要作用，而动力蛋白轻链则在其中 起调节作用．以这两种基因为探针分别与载有正常人16种组织mRNA的印迹膜进 DNLC2B的表达量高，DNLC2A在脑，肝、心高表达，其次为胰腺、胎盘、骨骼肌 和肾，而在肺、前列腺、睾丸、胸腺、小肠和结肠中为低表达：而DNLC2B除在 睾九、心脏中表达较高外，其余组织中低表达甚至检测不出。而且，通过肝癌和 (4 示这两个基因可能与肝癌相关。此外，我们还通过“RH mapp[ng”方法发现DNLC2A 基因定位于染色体20q11．22一q11．23．、 研究最为详细。有关研究表明，RTNI主要分布于神经和神经内分泌细胞中．它 在小细胞肺癌或是具有神经内分泌分化的非小细胞肺癌中有特异性剪接本的表 rke 达，因此，可以被用作鉴定上述两类细胞的[flar。RT／”4是我室前期克隆到的 一个基因，它在肝脏的表达转录本不同于其它组织．为了探讨这个蛋白家族与肝 中文摘要 癌的关系，我们重新分析了这4个基因地组织表达谱，并比较了他们的组织表达 2例肝癌肿的表达变化情 差异和特征，而后用Northern方法分别检查了它们在I 况。结果发现，RTNJ在正常肝组织和癌变的肝组织中都不表达；8TN2在肝癌肿 在肝癌肿均显著上调表达，但8TN4C呈下调表达。基于月删_和RTN4B在正常肝 组织中不表达，为检测这种特异性，我们将检测对象扩大到60例肝癌标本，结 果发现RTN4A在35例在肝癌中表达，而相应的癌旁组织中基本不表达．上述结 果提示RTN家族成员与肿瘤的发生有密切联系．＼ 三．癫痫引发的抽搐是由于大脑皮质神经元的阵发性放电所致。惊厥诱发 剂戊四氮诱发的抽搐是一种很好的阵发性放电模型．批前有人报道在小鼠中发现 的一种戊四氮所诱发的抽搐上调表达基因SEZ一6(seizure-related gene一6)编 码一种膜蛋白，它具有短的胞浆尾端，发挥信号传导功能。克隆和鉴定人的SEZ一6 对研究人的癫痫是有意义的。以SEZ一6BcDNA序列为信息探针，用同源筛选策略 在国际生物信息中心的人EST数据库中进行同源筛选，克隆到了人SEZ-6基因。 8 7S1 用RH定位系统将SEZ-6定位于染色体17ql2区，介于住标D1 00和D17S800。 同源比较分析表明，它与小鼠SEZ一6B在氨基酸水平的同源度为89％。象同源基