石榴籽原花青素提取纯化及其抗氧化活性的研究.pdf

摘 要 试验以怀远石榴（大笨籽、二笨籽和薄皮糙三个品种）为原料，对三个石榴 品种中的基本成分和主要次生代谢物质进行分析，并测定石榴籽中原花青素含 量，选择含量最高的品种进行石榴籽原花青素提取工艺研究。在单因素试验基础 上，选择对原花青素得率影响最大的超声波功率、pH 、料液比、乙醇浓度四个 因素，进行响应面分析，得到超声波辅助提取原花青素的最佳工艺条件。对粗提 液进行大孔树脂吸附纯化原花青素的工艺研究，选择适合的大孔树脂，研究吸附 和解吸工艺条件。分别测定试验所得原花青素的O2 - ·抑制率、·OH清除率和 DPPH·抑制率，并对小鼠进行 30d喂养试验，眼眶取血，处死后测定小鼠肝脏重 量、肝脏中SOD和GSH-Px 的活性及血清中MDA含量。试验得到主要结果如下。 （1）对大笨籽、二笨籽和薄皮糙三个品种石榴汁主要营养成分分析可知， 薄皮糙总糖含量最高，为 184.3mg/mL；二笨籽还原糖含量最高，为 110.9mg/mL； 大笨籽粗纤维含量最高，为 0.74mg/mL ；薄皮糙VC 含量最高，为 0.472mg/100g 果汁。二笨籽种子中油脂肪酸种类最多，共检测出 22 种，主要有棕榈酸、硬脂 酸、花生酸、山嵛酸、亚油酸、油酸、亚麻酸、石榴酸和α-桐酸等。薄皮糙、二 笨籽和大笨籽三个品种石榴籽原花青素含量分别为 54.4mg/g 、34.4mg/g 、 33.8mg/g 。 （2 ）响应面优化超声波辅助提取石榴籽原花青素最优工艺条件为：料液比 1:33、pH5.0 、乙醇浓度 51%、功率 125W，此时原花青素得率可达4.40% ，真实 值与预测值间的相对误差为 0.23% 。 （3 ）选取AB-8 大孔树脂，粗提液上柱的初始浓度 20mg/mL ，溶液pH4.5 ， 置恒温振荡器上 30℃、110r/min 振荡至充分吸附后，依次用 30%和 50%乙醇溶 液洗脱原花青素，洗脱液体积为层析柱体积的 4 倍，洗脱条件：解析液 pH4.5 ， 30℃、110r/min 恒温振荡，收集流出液，得到原花青素纯度为 85.3%。 （4 ）在测定浓度范围内，石榴籽原花青素和VC 对O2 - ·的抑制率、对·OH清 除率和对DPPH ·的清除作用均随浓度增加而逐渐加强。同浓度VC 抗氧化性能优 于石榴籽原花青素。对小鼠的 30 天喂养试验表明，中剂量组石榴籽原花青素可 以显著降低血清中MDA含量，对小鼠肝组织中SOD和GSH-Px活力有显著的提高 作用，但过高剂量石榴籽原花青素会对小鼠的肝脏造成一定程度的损伤。 关键词：石榴籽，原花青素，提取，纯化，抗氧化 I Abstract The juice and wine processing with pomegranate (Punica granatum) fruit will discard a large number of pomegranate seeds annually in China, which contain procyanidins with anti-oxidation, anti-aging and other physiological activity. The application of procyanidins extracted from pomegranate seed would have broad prospects in the industry development. ‘Dabenzi’, ‘Erbenzi’ and ‘Bopicao’, the typical varieties of Huaiyuan pomegranate were chosen as raw materials in this experiment to analyze essential ingredients and secondary metabolites. The content of procyanidins in pomegranate seed was determined