《利用Gateway技术快速构建棉花GhANS基因植物表达载体 Construction of Plant Expression Vector for GhANS Gene of Cotton Using Gateway Technology》.pdfVIP

新疆农业科学2013，50 10 ：1773—1778 Sciences Agricultural Xinjiang doi：10．6048／i．issn．1001—4330．2013．10．002 利用Gateway技术快速构建棉花 GhANS基因植物表达载体 孙宏伟1，李艳军1，王雅琴2，刘永昌1，薛飞1，孙杰1 1．石河子大学农学院／新疆兵团绿洲生态农业重点实验室，新疆石河子832003；2．石河子大学生命科学学院，新疆石河子832003 摘要【目的】为了进一步探讨GhANS 花色素合成酶 基因的上调表达对彩色棉纤维色素合成的影响，构建 了棉花GhANS基因的植物表达载体。【方法】利用Gateway技术的同源重组原理，将ChANS基因通过BP反应 定，PCR扩增片段与酶切片段大小与预期结果相一致。【结论】基于Gateway技术的棉花GhANS基因的过表 达载体和干扰表达载体已构建成功，为进一步研究该基因的功能及棉花的遗传转化奠定了基础。 关键词：彩色棉；花色素合成酶；Gateway技术 文献标识码：A 中图分类号：s562；S188．1 文章编号：1001—4330 2013 10—1773—06 ConstructionofPlant VectorforGM嬲GeneofCotton Expression UsingGatewayTechnology SUN Jiel Feil，SUN Hong—weil，LIYan—innl，WANGYa—qin2，LIUYong—chan91，XUE and Oasis ProductionConstruction 1．KeyLaboratoryof Eco—agricultureofXinjiang c0删，Collegeof Agronomy，ShiheziUnive瑙ity，Shihezi，Xinjiang832003，China；2．Collegeof劭它Science，ShiheziUniversity， Shihezi Xinjiang832003，China ofthis istoconstructcottonGhANSof Abstract：【Objective】Thepurpose project geneplantexpression vectorinorderto theeffectsof of offlower explore up—regulatedexpressionsynthetasegene pigments cottonfiber wasrestructuredtothe vec． GhANS inpigmentsynthesis．【Method】GhANSgene overexpression tor andinterferencevector viaBPandLRreaction basedonthe pGWBl7 expressionpANDA35HK respectively recombinationof validationPCRandrestriction homologous Gatewaytechnology．【Result】Theby enzymes， of andPCR sizewereconsistentwiththe segmentsenzymefragment products results．【Conclusion】 expected Basedonthe ofcottonGhANS vectorandinterference Gatewaytechnology geneover—expression expression vectorhasbeen haslaidafoundationforfurtherofthefunctionof constructed，which successfully study genes and transformationofcotton． genetic words：colored Key cotton；anthocyanidinsynthetase；gatewaytechnology 0 引言 【研究意义】近年来随着人们健康和环保理念的增强，彩色棉引起了广泛关注。彩色棉纤维颜色的 收稿日期：2013—04—12 2011ZX08005 作者简介：孙宏伟 1984一 。男，河南周口人，硕士研究生，研究方向为作物遗传育种， E—mail shwshz@163．corn 通讯作者：李艳军 1978一 ，女，新疆昌吉人，讲师，研究方向为棉花分子育种， E—mail 1yj座机电话号码@sina．COfft．C11 万方数据 1774 新疆农业科学 50卷 形成与色