《Class I patatin基因5＇侧翼区驱动的GUS基因在马铃薯块茎中专一性表达》.pdfVIP

第34卷第1期 实验生物学报 V。l 34，№1 2001年3月 Acta Bi。109iaeE础订mentallsSinjca M∽h 200l ClassI patatin基因57侧翼区驱动的GUS基因 在马铃薯块茎中专一性表达。 宋东光周 健黄大庆马欢司徒继锋王光清汪训明 (夏旦大学遗传学研究所，遗传学和遗传工程国家重点实骑室．上海200433) 马铃薯Isok㈣ⅢmbPr∞“m cA喊1_rGG一3 L)块茎中的 7)由中科院上海植物生理研究所台成。 =、方法 patatjt：是分子量约40kDa的一种糖蛋白，在块兰形 成过程中积累，可占块姜可溶性蛋白的40％以上， l表达载体构建参照S∞出2∞k等的方法引。 表现明显的块攀专一性，在正常植株的茎、叶和根 2．马铃薯组织培养：无菌苗的培养基为Ms(06％琼 脂，3％蔗糖，pH5．8—60)，愈伤组织诱导及植株再生培养 中含量很低。Patatjn由多基因家族编码，完整的 基为RB(Ms+2．0mg／L patatin基因台有6个内含子和7个外显子，约4—5 培养条件均为25℃，光照16 kb¨-。根据5 7不翻译区在转录起始点上游是否有 0 导在TBc培养基[Ms+1mg／LBAP(6一苄氮基嘌呤) 22 II bp插入可将patatin基因分为(：lⅫsI与aass 十l0mg／L zT(玉米索)+500mg／LCCC(矮壮索)，6％ 两大类。classI转录物为块茎专一，57不翻译眨没 蔗糖]上进行，22—24℃，略培养。 有22bp插入，占98％以上；而claSsII转录物在块 3GuS瞬间表达：将TBc培养基上培养约一个月的 茎和根中均有表达，但族达水平很低KJ。 块茎切成约05一In仰厚，紧凑摆放在TBr培养基的平板 中兜区2—3cm，25℃，暗培养3天。基因怆轰击根据 ClassI摹冈5’侧翼区勺GUS基因的建构物在 转基因马铃薯中表现r块茎高专一性表达，鼠在高 浓度蔗糖诱导耐，在茎叶中F游基因的表达得到提 轰击后的材料继续培养24jI’取出后用xGjuc染色t3]进行 高”j。class l基因5’侧翼区顺序越长，则块茎专一 GuS瞬问表达的检测一 性越高HJ。Cla5s儿基因57侧翼区勺GUS基因的建 4农杆菌转化：按BRL操作说明片j电击浃将表达裁体 构物的表达显著低于cksI建构物，且小表现蔗糖