超嗜热古菌真核同源的Orc1Cdc6蛋白和复制原点之间的相互作用的研究.pdfVIP

摘要 极端嗜热古菌硫磺矿硫化叶菌(sutfolobussolfataricusP2)含有三个有活性的复 制原点和三个真核类似的Orcl／Cdc6蛋白(命名为SsoCdc6．1，SsoCdc6．2和 清楚古菌的这种多个Orcl／Cdc6蛋白之间能否通过功能性的相互作用共同来调控 DNA复制起始。本研究采用纯化的复制起始蛋白SsoCdc6及其突变体，在体外比较 研究了它们与两个复制原点DNA之间的相互作用，特别是首次对古菌的多个 SsoCdc6蛋白相互调控它们与原点DNA的相互作用进行了系统的生化分析。本研究 主要取得了以下几个方面的结果： AC)的大肠 杆菌表达菌株，并通过热处理和Ni-NTA镍琼脂糖凝胶亲和纯化等步骤获得纯度达 A 99％以上的SsoCdc6蛋白和SsoCdc6 和oriC2的结构特征，设计了分别包括分叉和平端两种结构的三组特异性DNA底 物。这些底物的共同特征是含有相互重叠的SsoCdc6结合位点。 ‰