有机磷农药降解菌的分离鉴定及产酶特性的研究.pdfVIP

有机磷农药降解菌的分离鉴定及其产酶特性研究 摘 要 有机磷农药的广泛使用造成了严重的环境问题，并已对人类健康带来潜在危害。有机 磷农药残留的去除尤为重要，有机磷农药降解微生物及其产生的降解酶是消除有机磷农药 污染的有效、安全的方法，最具应用前景。 从有机磷农药污染的土壤中分离得到的三株有机磷农药降解菌：JMUPMD-1 ， JMUPMD-2 ，JMUPMD-3 ，利用形态观察、生理生化实验和rDNA ITS 序列分析分别对三 株菌进行鉴定。对 JMUPMD-3 菌株产有机磷农药解酶进行摇瓶培养优化，根据优化结果 进行7 L 罐发酵，对菌株的发酵动力学进行分析。 JMUPMD-1 的rDNA ITS 序列与布朗克假丝酵母(Candida blankii) 的同源性为99%，形 态特征和生理生化特性与布朗克假丝酵母相符合，因此鉴定为布朗克假丝酵母。 JMUPMD-2 rDNA ITS 序列与米曲霉(Aspergillus oryzae) 的同源性为99%，菌落形态和显微 形态都与米曲霉特征相符，鉴定为米曲霉。JMUPMD-3 的 rDNA ITS 序列与黄蓝状菌 (Talaromyces flavus) 同源性为99%，形态特征与黄蓝状菌基本符合，鉴定为黄蓝状菌(无性 世代为Penicillium vermiculatum Dangeard) 。 三株菌产生的甲基对硫磷(Parathion-methyl，PM) 降解酶均属于胞内酶，其中，T. flavus JMUPMD-3 的产酶能力最强。摇瓶优化后的培养基及培养条件为：蔗糖19.0 g/L，酵母膏 3.2 g/L，MgSO ·7H O 0.5 g/L ，KCl 0.5 g/L ，FeSO ·7H O 0.018 g/L ，Triton X-100 2% (v/v) ， 4 2 4 2 甲基对硫磷乳油 0.2% (v/v) ，发酵液初始pH 8.0 ，培养温度24 ℃。用初始培养基在7 L 罐 中发酵T. flavus JMUPMD-3 ，PM 降解酶活力最高为46.1 U/L ，采用优化的培养基和培养条 件发酵，PM 降解酶活力最高为127.1 U/L，比第一批提高了183%。在第二批7 L 罐发酵 基础上，取消Triton X-100 添加，并维持发酵过程培养基的pH 为6.0，生物量提高3.2 g/L， 最高酶活力水平持平，但稳定期延迟。动力学分析表明，菌株对数生长期的24 h−56 h，PM 降解酶的合成与菌体的生长相偶联，PM 降解酶的合成与PM 的消耗有关，而PM 的消耗 不受酶产生的影响。PM 降解酶对敌敌畏也有良好降解作用，可能属于广谱性有机磷农药 降解酶。 分离到三株有机磷农药降解真菌：Candida blankii，Aspergillus oryzae ，Talaromyces flavus ，其中Candida blankii 和 Talaromyces flavus 降解有机磷农药的报道较少，增加了新 的有机磷农药降解真菌资源。对T. flavus JMUPMD-3 产PM 降解酶进行了摇瓶优化和7 L 罐发酵初试，为进一步提高菌株产PM 降解酶活力奠定了基础。 关键词 有机磷农药，微生物降解，布朗克假丝酵母，米曲霉，黄蓝状菌，分离鉴定，产 酶特性 I Isolation, Characterization and PM Degrading Enzyme production of Organophosphorus Pesticide Degrading Fungi Abstract The extensive use of Organophosphorus Pesticides (OPs) made them common environmental pollu