大肠杆菌质粒介导的耐氟喹诺酮类药物6个基因PCR检测的研究.pdf

四川农业大学硕士论文 中文摘要 本研究选择2006．2008年从四川、河南、甘肃、福建和江西5个省区的规模化猪 场、医院及野生动物园分离鉴定的共256株大肠杆菌作为实验菌株。采用K．B纸片 的耐药表型。研究结果表明，256株实验菌株对6种氟喹诺酮类药物的总耐药率分别 酸耐药为主(64．13％。)～；野生动物源菌株虽然对6种氟喹诺酮类药物相对敏感，但 仍然检测出低水平的耐药性，耐药率为12．50％，以对诺氟沙星耐药为主(8．33％)。 三重PCR检测方法建立的目的基因，并在确定单基因PCR扩增体系各个参数的最佳 值和可变动范围的基础上进行目的基因三重PCR扩增体系的建立与优化，其中包括 Buffer 等相关参数的优化，得出三重PCR最佳反应体系：10xPCR 2．5山，MgCl2(25 No mmol／L)3山，dNTP(2．5mmol／L)3．5m，模板2．5m(菌液浓度相当于McFarland DNA聚合酶(2．5U／p1)0．35山，上下游引物(25 1．0)，Taq pl。最佳扩增反应参数为： p1)、qnrS(0．6出)、qnrD(0．5山)，最后补充灭菌去离子至25 94℃预变性5 最后72℃延伸10miIli 4℃保存。运用建立的大肠杆菌PMQR基因三重PCR方法检 株中有一定检出率，其中，aac佑．乃．cr基因分布较普遍，检出率为20．83％。 qnrA、qnrS和g刀缈基因未在野生动物源菌株中检测到。 四川农业大学硕士论文 ———————————————————————————————————————————————————————————一一 内猪源、人源及野生动物源大肠杆菌中的检测情况作了系统全面的分析。为该领域的 研究工作提供了有价值的基础数据。 关键词：大肠杆菌氟喹诺酮类药物(FQs)三重PCR质粒介导耐药基因 H 四川农业大学硕士论文 ． of sixEscherichiacoli onPCR Study detecting andIts ResistanceGenes Molecular Quinolone Epidemiology Abstract Weused todetect256Escherichiacoliisolatescollected K．．B(Kirby．．Bauer)method at scale andwildanimalZOOSin5 inChinafrom2006 large pig provinces farms，hospitals theresisrancerateto and to2008。Theresultsshowedthat strmns 40．63 LEVin256Ecoli were