鹅细小病毒VP基因片段在原核系统中的表达及其抗血清的制备.pdf

摘 要 苷酸及从vP3的3’．端到864位核苷酸的基因片段，这三个片段的两个重合区分别包含 了VP2．VP3非重合区和VP3的中部，再分别将这三个基因片断连入原核表达系统中进 行表达，并将它们相应的表达产物命名为F1、F2、F3。前期工作已经完成了F2的原核 表达纯化、抗血清的制备及其免疫活性的检测。 序列测定。再把这两种重组质粒分别转化入大肠杆菌DH5d和BL21。用口TG诱导后 F3，通过薄层扫描分析显示F1表达量最多可占工程菌菌体总蛋白的22．8％。分别诱导 两种工程菌后用6mol／L盐酸胍裂解，再经超声处理后离心，用镍离子亲和树脂对裂解 的抗血清不但能与F1反应还能与亲本株GpVHG5／82的两条蛋白带发生反应，这两条 的分子量一致。该结果证明融合蛋白F1和F3与F2～样具有良好的免疫原性。由于 GPV三种结构蛋白具有共同的羧基端，因此在理论上，存在于vP3的表位应该也存在 兔抗血清与亲本株的westemblot结果，初步对GPV HG5／82株vP蛋白的B细胞线性 性抗原表位，第198～220位氨基酸残基之间没有B细胞线性抗原表位。 本研究为定位GPV VP蛋白的抗原表位及开发研制抗鹅细小病毒感染的基因工程 疫苗和诊断试剂提供依据。 关键词： 鹅细小病毒，衣壳蛋白，原核表达，抗血清 Abstract h1ord盯to Bcell aIId the ofVirals觚ctIlral of sequencial st【ldy a11tigeIlicity procein mappillg epitopes into wim 111iddleof oVerlapped毕2一P3矗nd血e goosepa“ovirus(GpⅥ，weput血。甲gene3曲gmellts are at5’-end at5’-end at3’-end to vp3．111q662bp ofvpl，969bpof旧，and864bp ofvp3．weplalled 1he mese如sion syst咖tosmdyreac吐Vj印0f pIote虹 expressmese丘a肿印tsiⅡprokaryonccxpression and n锄ed也ese as study，F2 t髓lativdy expresssed矗lSionproteiIlFl、F2、F3，respectivelyIⅡpr刚ous F2 and an矗senlm hadb∞n by rabbit，aIld hadbe∞既pressedpurified．ne ag出t pr印缸edi衄mizing hadbeen westemblot． testified reacⅡvi母of山e∞血erum by at5’-end aⅡda at3’-end of hmis咖dy，a662bp舡gmentof印1geⅡe 864bp缸gnlentof印gene GPVis01atcHG5，82was PC凡Wei11sened也e