广西岩溶地区烟草黑胫病拮抗细菌的筛选和特性的研究.pdf

广西岩溶地区烟草黑胫病拮抗细菌的筛选与特性研究 区婵 专业：野生动植物保护与利用 研究方向：生物防治 年级：2007 级 导师：黄宁珍 副研究员， 何金祥 研究员 摘 要 烟草黑胫病是桂西岩溶区烟草的主重病害，目前以化学防治为主，农药残留污染环境、 危害人畜健康并使病原产生耐药性。生物防治具有无污染、无公害和长效性等优点，是今 后烟草病害防治的主要方法。因此，本研究从广西岩溶区靖西县优质烟叶生产区分离烟草 黑胫病病原及土壤细菌，通过拮抗试验、抗病能力测试等方法筛选拮抗菌株，对效果良好 的株系再进行分类鉴定、抗病物质分析、小规模发酵和田间施用技术等研究，结果如下： 1. 从 8 份土壤样品中分离获得 462 株细菌，其中 82 株对烟草黑胫病菌有拮抗效果； 复筛后得到拮抗效果较好的细菌 16 株；再依据抑菌圈大小、盆栽实验结果，获得拮抗效 果良好的拮抗菌 3 株，编号为 8-23、6-70 和 13。 2. 采用形态观察、生理生化测定、16S rDNA 序列分析三种方法相结合，鉴定 8-23、 6-70 和 13 三个菌株的种属关系。结果表明，菌株 8-23 为芽孢杆菌属(Bacillus spp.)枯草芽 孢杆菌 Bacillus subtilis 的近缘种；菌株 6-70 可能为溶菌杆属(Lysobacter spp.)细菌；菌株 13 为假单胞杆菌属(Pseudomonas spp.)细菌。 3. 三个拮抗细菌的基本发酵工艺：(1) 菌株 8-23：种子菌龄 12 h，接种量 1%；在 pH6.0 马铃薯麦芽糖培养液、90/200 ml (培养基体积/三角瓶容积，以下相同) 、30℃、180 rpm 条 件下培养 24 h 。 (2) 菌株 6-70：种子菌龄 12 h，接种量 1%，在pH6.0 马铃薯麦芽糖培养 液、30/200 ml、 30℃、180 rpm 条件下培养 24 h 。 (3) 菌株 13：种子菌龄 12 h，接种量 1%， 在 pH6.0 马铃薯麦芽糖培养液、30/200 ml、30℃、240 rpm 条件下培养 24 h 。 4. 三个拮抗细菌的抗病机制及其抗病物质特性：菌株 8-23、6-70、13 的抗病机制都是 通过溶解细胞壁、使细胞质渗漏、破坏细胞结构和功能，从而达到抑菌抗病的目的。其抑 菌物质的基本特性如下：(1) 菌株 8-23 的抑菌成分大部分为耐高温蛋白质，对有机溶剂敏 感，(NH ) SO 盐析沉淀物有抑菌活性；(2) 菌株 6-70 的抑菌成分部分为耐高温蛋白质， 4 2 4 对有机溶剂敏感，(NH ) SO 盐析沉淀物有抑菌活性；(3) 菌株 13 的抑菌成分不耐高温， 4 2 4 可能含有多种脂溶性成分和少量蛋白质，(NH SO 盐析沉淀物有抑菌活性。 4)2 4 关键词： 烟草黑胫病；土壤拮抗细菌；生物防治 Selection and Characteristic of Antagonistic Bacteria against Tobacco Black Shank disease in karst area of Guangxi Name: Ou Chan Major: protection and utilization of wild life Research field: biological control; Grade: 2007; Tutor: Associate Pro. Huang Ning-zhen, Pro. He Jing-xiang Abstract Tobacco black shank is the major diseases of tobacco in karst of southwest