广西猪戊型肝炎分子流行病学调查及其戊型肝炎病毒ORF2的扩增和抗原性分析.pdfVIP

广西猪戊型肝炎分子流行病学调查及戊型肝炎病毒ORF2的扩增 和抗原性分析 摘要 Evirus，HEY) 戊型肝炎(HepatitisE，HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis 引起的消化道病毒性肝炎。大量的报道已经证实，HE在国内外均非常的盛 行，人和多种动物对HEV均易感。广西为我国养猪大省，但对于猪群HE 的调查及HEV的抗原性研究仍处于起步阶段，因此弄清广西猪戊型肝炎的 流行状况、猪源HEV与人源HEV在基因水平上的差异、HEV抗原表位的 分布及抗原性基因的特征，对于戊型肝炎的防治、疫苗的研发都具有重大 的意义。 03月从广西6个市县13个不同规模猪场采集的135份新鲜猪粪进行检测。 结果显示135样品中有38份为HEVRNA阳性，阳性率为28．1％。在调查 的13个猪场中，仅有一个猪场未检测到HEVRNA，猪场阳性率为92．3％。 各猪场样品检出率在0．44．4％之间，13各猪场中有8个猪场感染率处于 30．45％之间。 对13个猪场中各种年龄样品均能采集到的6个猪场的猪群进行感染率 调查，67份不同月龄的样品中，O．30日龄HEVRNA阳性率为O％；31．60 日龄阳性率为7．7％；61．90日龄HEV RNA阳性率最高，为58．8％；当猪群年龄超过120日龄后HEVRNA阳性 率逐渐降低，阳性率为30．8％。结果显示2．4月龄为猪群的感染高峰期，32 份样品中有16份样品为HEVRNA阳性，阳性率为50％。 随机对24份阳性样品进行克隆，去除4份同源性为100％的分离株后 得到20株同源性不一致的毒株。20株分离株间核苷酸同源性为91．2．99．7％。 与基因型I型、II型、III型、Ⅳ型及禽HEV参考序列核苷酸同源性分别为： 株间氨基酸同源性为97．7．100％，其中13株氨基酸同源性为100％。与基因 型I型、II型、ⅡI型、Ⅳ型及禽HEV参考株氨基酸同源性分别为： 92．4．95．5％，93．1—93．9％，94．7．97％，97．7．100％，55．6．56．5％。 通过用MEGA 及各基因型参考株进行进化树构建与分析，结果显示所有的分离株均属于 基因型Ⅳ型。在所有Ⅳ型序列中又可以分为6个亚型，本研究所有的分离 株都分布在亚型b中。 研究二，参考中国T1株序列设计巢式引物，从新鲜猪粪中扩增HEV ORF2 部分基因片段，长为1725bp，位于HEV205—1929bp之间，命名为 1、HEVORF2一B2、 HEVORF2．A三段连续的基因片段，命名为HEVORF2一B HEVORF2-B3，分别位于HEVORF2-A 1-576bp，577—1149bp，1150-1725bp II 高水平的融合蛋白表达。用自然感染猪血清和万泰HEV ELISA诊断试剂盒 阳性对照血清进行western。blot检测，三个短的融合蛋白均能检测到明显的 条带，表明本研究所构建的三个表达载体具有良好的抗原性。 关键词：广西猪戊型肝炎病毒扩增进化树ORF2原核表达抗原 性 III EIN EPIDEMIoLoGYOFHEPA汀ITIS MoLECULAR E GUANGXIPIGANDAMPLIFICATEHEPATITIS VIRUSORF2ANDANTIGENICANALYSIS ABSTRA