共表达dll4，p16基因真核表达载体构建及其对白血病细胞的影响.pdf

共表达d114，p16基因真核表达载体构建 及对白血病细胞K562的影响 摘要 目的：本文构建真核基因双表达载体pBudCE4．1．d114．16，并将构建的真核双表 2000转染慢性粒细胞白血病细胞株K562，观察目的 达载体通过Lipofectamine 基因在白血病细胞株K562中的表达情况，进而研究其对白血病细胞增殖情况的 抑制作用，为进一步研究多种基因同时用于肿瘤治疗奠定一定基础。 段：一是转染48小时后，收集各组细胞，用RIPA裂解细胞，免疫印迹法检测 外源性目的基因瞬时转染的表达水平；二是通过Cell CountingKit．8(CCK．8)，描 绘各试验组细胞的生长曲线；三是转染48小时后，经70％预冷乙醇固定，PI染 色后，通过流式细胞仪检测各试验组细胞的周期分布情况。 双表达载体pBudCE4．1．d114．16，通过限制性核酸内切酶酶切方法鉴定插入基因 的位点与预期相符。通过脂质体法将各组质粒成功转染入白血病细胞株K562中， 转染后48小时，采用免疫印迹技术检测到野生型d114、p16基因在白血病细胞 均高度表达d114蛋白，其余三组均中度表达。转染48小时后，通过PI染色处 理，经流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期分布情况，相比较于对照组，实验组 细胞Go／G1期增多，差异有显著统计学意义(P0．001)。细胞生长曲线显示，细 胞生长受到明显抑制，尤其是实验组细胞。 目的基因，诱导细胞周期停滞于Go／Gl期，抑制细胞生长，但不诱导细胞凋亡。 质粒构建基因转染共表达周期 关键词：d114基因p16基因pBudCE4．1 ConstructionofRecombinantPlasmid pBudCE4．1·d114-16 anditsEffectonLeukemicCellsK562 Abstract articleconstructsavector human d114and objective：This containingsuppressorgene l6 the 2000to thed114and161NK48intotheLeukemic INK4a,uses p Lipofectaminedry p inLeukemiccells．Tofurther cellline its andfunction K562，and observingexpression kindsof touseinthetumortreatmentthefoundation． studymany genes laying Methods：Recombinant 6was andconstructed plasmidpBudCE4．1一d114—1designed INK4a forsimultaneous ofhuman d114andl6 in expression suppressorgenes p cellsK562with mamma