枸杞、黄芪对大鼠睾丸支持细胞功能的作用探讨.pdf

中文摘要 枸杞、黄芪对大鼠睾丸支持细胞功能的作用探讨 摘 要 目的：支持细胞(Sertolicell)是睾丸中一种有重要功能的 细胞，除了对生精细胞起支持和营养作用外，Sert01i细胞还 等多种因子，形成并维持有利于精子发生的微环境。越来越 多的研究表明，SeIrt01i细胞分泌的抑制素B(INHB)是目 前评价精子发生最好的内分泌标志物。枸杞、黄芪是我国传 统的名贵中药材，长期以来一直被祖国医药用作补肾益气的 药物，具有保护睾丸功能的作用，用于治疗和改善男性生殖 功能。枸杞与黄芪对生殖功能的影响目前有一定的报道，但 仅限于组织形态学方面的研究。因此我们希望将睾丸Sert01i 细胞的功能与枸杞、黄芪二者的研究联合起来，从细胞和分 子水平研究中药对生精功能的作用，为研究男性生殖功能调 控寻找一个新思路。本研究拟将大鼠睾丸Sertoli细胞进行体 细胞分泌的与生精功能相关的激素一小m的表达情况，观察 枸杞多糖、黄芪提取液及两药联合使用(组成杞芪合剂)对 能的调控及其机理提供基础实验依据。 方法：本研究分两部分 1大鼠睾丸Sertoli细胞的培养、鉴定与小m的表达 取18—22日SD大鼠睾丸组织，采用改良的两步酶消化 中文摘要 条件下进行培养，用MTT法描记Sertoli细胞的生长曲线， 方法对纯化的SeIrtoli细胞进行鉴定，同时用免疫组织化学方 法检测Sert01i细胞中INH pB亚基(小时pB)．的表达情况。 2枸杞、黄芪对大鼠睾丸SeIrtoli细胞功能的影响 本组研究分三小部分 2．1枸杞、黄芪对睾丸SeIrtoli细胞增殖的影响 分别用枸杞、黄芪、杞芪合剂三组药物处理体外培养的 为对照，用MTT法观察上述药物处理对睾丸Sert01i细胞增 殖的影响。 2．2枸杞、黄芪对睾丸Sertoli细胞仆mpB合成的影响 用枸杞、黄芪、杞芪合剂三组药物处理体外培养的SeIrtoli 细胞，同时以体外正常培养的SeIrtoli细胞作为对照，用免疫 组织化学方法观察药物处理对正常状态及过氧化物损害状 态下Sertoli细胞INHpB合成的影响。 mRNA水平的影响 2．3枸杞、黄芪对Sertoli细胞INHpB 用总RNA提取试剂盒提取体外培养的Sertoli细胞总 mRNA片段，同时 IⅢA，采用一步法RT—PCR检测INHpB mRNA片段作为内参照，观察枸杞、 反转录并扩增GAPDH 黄芪、杞芪合剂三组药物对正常状态及过氧化物损害状态下 Sert01i细胞INHpB 胞的功能状态。 中文摘要 结果 l大鼠睾丸SeIrt01i细胞的原代培养、鉴定与INH的表达 采用胰蛋白酶与胶原酶两步消化分离法从每只SD大鼠 睾丸中获取的Sertoli细胞总数约为1．1．2×107个，活细胞可 达95％以上。SeIrtoli细胞的体外生长方式为贴壁生长，胞体 呈长柱状或不规则状，有多个突起，细胞核为卵圆形或不规 则形，位于胞体中央，艘染色呈嗜伊红染色，胞质内可见 的倍增时间约为48小时。 中INH0【、小mpA、INHpB的表达均为阳性表达。 2枸杞、黄芪对大鼠睾丸Sertoli细胞增殖的影响 与对照组比较，高剂量的枸杞对Sertoli细胞的增殖有促 进作用，高剂量黄芪对Sert01i细胞的增殖有促进作用，高剂 量的杞芪合剂对Sertoli细胞的增殖有明显促进作用，但杞芪 合剂的促增殖作用与枸杞组及黄芪组相比无明显差别。 3枸杞、黄芪对睾丸Sertoli细胞INHpB合成的影响 在正常培养状态下各加药组与未加药对照组比较，枸杞 1．9％；其中枸杞组作用优于黄芪组，杞芪 INH阳合成增加3 合剂组作用优于枸杞组及黄芪组。 合成明显降低，只达到正常水平53％，与只加H202的对照 中文摘要 成增加36．4％；枸杞组的作用与黄芪组相比较无明显