骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储对大鼠同种异体气管移植的作用的实验的研究.pdf

目录 一、摘要 中文摘要………………………………………………．．1 英文摘要………………………………………………．．7 二、英文缩略语…………………………………………．．15 三、论文 论文一…………………………………………………16 前言………………………………………………．．16刖百………………………………………………．．16 材料和方法…………………………………………．．17 实验结果……………………………………………．23 讨论………………………………………………．．25 论文二…………………………………………………．27 前言………………………………………………．．27再U看………………………………………………．．Z’， 材料和方法…………………………………………．．28 实验结果……………………………………………．30 讨论……．…………………………………………．．33 论文三…………………………………………………．34 前言………………………………………………．．34日U舌………………………………………………．．34 材料和方法…………………………………………．．35 实验结果……………………………………………．37 讨论………………………………………………．．43 结论…………………………………………j……．45 四、本研究创新性的自我评价………………………………．．46 五、参考文献…………………………一………………．．47 六、附录 综j苤………………………………………………．．52 致谢………………………………………………．．69 个人简介……………………………………………．70 ·中文论著摘要· 骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储对大鼠同种异 体气管移植的作用的实验研究 目的 临床上经常遇到因先天性疾病、炎症、肿瘤、或其它因素引起的广泛气管病 变而需要进行节段切除和气管重建。疾病导致气管节段切除后端端吻合的安全长 度为成人1／2、小儿1／3的气管长度。超过此长度时，如何修复缺损气管是国内 外胸外科的热点和难点问题。关于气管替代物的研究有许多尝试，包括同种异体 气管、非气管的自体组织(如小肠)和人工气管假体(如金属支架)等。近年来 组织工程化气管的研究，包括支架(生物材料)和种子细胞的选择、移植物再血管化 和上皮再生等方面取得了一些进展。但是，由于气管的特殊的生理特点和功能需 要，目前仍未找到理想的组织工程化气管，因而同种异体气管仍然是临床上的首 选。对于供体气管的储存，移植后的免疫排斥反应的抑制，移植气管的上皮再生 和再血管化是临床应用前亟待解决的难题。 本博士论文的设计旨在解决以上的难题，对如何储存供体气管，降低异体气 管的免疫原性，促进移植气管的上皮再生和再血管化进行了研究。我们应用静脉 移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管进行同种异体气管移植，探讨深 低温处理对于减轻移植后的免疫排斥反应和骨髓间充质干细胞在促进移植气管上 皮和新生血管生成中的作用，为将来的临床应用提供实验依据。 材料和方法 一、大鼠深低温同种异体气管移植动物模型的建立及冻储2wk 和6wk气管移植的比较 (一)实验材料 1、实验动物 清洁级Wistar大鼠，体重280300 g，分别作为大鼠同种异体气管移植的供体 和受体。 2、主要试剂 冷冻保护剂(DMEM培养基，胎牛血清，二甲基亚砜，蔗糖，青霉素，链霉 素，二性霉素B)，水合氯醛 3、主要仪器 超净工作台；液氮罐；手术器械；光学显微镜；电子显微镜。 (二)实验动物和分组 雌性Wistar大鼠，由中国医科大学实验动物部提供。作为气管移植供体的大 鼠14只，每只大鼠可提供2个8～10个气管环的供体气管。作为气管移植受体的 wk和6 大鼠40只，随机编号分为4组，即分别移植深低温2