穿心莲内酯衍生物抑制糖苷酶的3D-QSAR及其多羟基酚类化合物的抗氧化理论的研究.pdf

塑型查兰壁主兰丝笙茎 一 一—— 摘要 本文的研究工作分为两个部分，第一部分研究了新型穿心莲内酯类衍生物抑制a一 葡萄糖苷酶活性的三维定量构效关系(3D．QSAR)，建立了糖和糖苷酶抑制剂数据库。第 二部分讨论了白英中化学成分的提取分离和结构鉴定，研究了白英提取物中多羟基酚类 化合物的结构与抗氧化活性的关系。 一．新型穿心莲内醑衍生物抑制n一葡萄糖苷酶的3D—QSAR研究 在测定穿心莲内酯衍生物的n一葡萄糖苷酶的抑制活性时，使用的a一葡萄糖菅酶的 三维晶体结构还未见报道，所以选用同源建模的方法来构建该a一葡萄糖苷酶的三维结 个氨基酸构成。用蛋白质多序列比对程序BLAsT在PDB数据库中进行序列相似性搜索， 获得序列同源性达38％的蛋白1uoK。使用Insight 模板对实验使用的a一葡萄糖昔酶进行同源模建。使用Profile一3D模块对已构建的。一 葡萄糖苷酶的三维结构模型进行可靠性分析，发现模板与模建分子的n碳原予之间的标 准偏差为O．42A，构建的三维结构得分为237．9分，远远高于临界得分120．2分，略低 于理想得分267．2分。因此，说明模建得到的a一葡萄糖苷酶的三维结构在现有理论水 的LigandFit模块完成穿心莲内酯衍生物与Ⅱ一葡萄糖苷酶的对接，讨论了它们之间的 相互作用模式，研究表明，形成氢键和静电相互作用是抑制剂与受体相互作用的重要特 征。利用cerius2软件中的QSAR模块获得了穿心莲内酯衍生物抑制n一葡萄糖苷酶的三 常规相关系数为0．996，说明方程的可信度相当高。该研究为设计新型穿心莲内酯类a一 葡萄糖苷酶抑制剂提供了有力的帮助。 基于∞LIsIS／队sE数据库平台，建立了糖和糖苷酶抑制剂穿心莲内酯衍生物分子 数据库，已收录糖分子288、穿心莲内酯衍生物238，以利于新合成化合物的分类，虚 拟筛选，综合利用。 二．白英中化学成分的提取分离及提取物中多羟基酚类化合物的结构与抗 氧化活性的关系研究 对白英采用系统溶剂提取法对其化学成分进行了提取。选用乙醇为提取溶剂，乙醇 提取液浓缩成浸膏，依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。对萃取得到的浸膏采用葡聚 糖LH一20、硅胶柱层析和制各薄层层析进行分离纯化，乙酸乙酯部位和正丁醇部位各分 得化合物4个，经波谱(NMR、MS、IR)方法鉴定了它们的结构，分别为3一甲氧基 一5一[(8’s)一3。甲氧基一4。羟基一苯丙醇卜E一苯丙烯醇一4—0一B—D一葡萄糖苷、芹菜素 摘要 白藜芦醇、腺苷和薯蓣皂苷元。除薯蓣皂苷元外其它7个化合物为首次从白英中分离得 到。 利用水蒸汽蒸馏法对白英挥发油成分进行提取研究，经GC—MS分离鉴定，分离出 154个化学组分峰，并鉴定出其中47个化学成分，占挥发油总成分含量的83．23％，主 要成分为棕榈酸和亚油酸。对白英的氯仿、乙酸乙酯冷浸提取液也进行了Gc—惦分析， 分别鉴定出41种和26种化合物，两部分主要成分亦为棕榈酸和亚油酸。GC—MS法共从 白英中分离鉴定出化合物93种，主要成分为有机酸类、酯类、烷烃类和烯烃类等。 从白英中首次分离出的白藜芦醇、槲皮索、柚皮素、芹菜素这些多羟基酚类化合物 具有一个共同的特征是有较强的抗氧化活性。因此我们对这类化合物开展了进一步的理 论研究。 对于多羟基二苯乙烯类化合物白藜芦醇使用MsModeling软件包中的Dmol3模块， 利用其中GGA的BLYP泛函和DND基组，在默认的精度设置下确定了顺、反式自藜芦醇 分子的最稳定结构，计算了顺、反式白藜芦醇中三个羟基分别形成自由基后的最低能量 构象。讨论了顺、反式白藜芦醇上三个不同羟基形成的自由基的稳定性，从分子前线轨 道，对应羟基的离解能，自由基的自旋分布等几个方面确定4’位羟基是最有可能的抗氧 化反应活性中心。按照氢转移机理设计了反式白藜芦醇三个羟基分别消去过氧化氢自由 基的反应，得到了每个反应的过渡态结构，并讨论了反应路径申各驻点的性质，描绘了 反应势能面变化示意图，再一次从反应动力学和热力学角度证明了4’位羟基具有较高的 抗氧化活性，解释了三个羟基之间的活性差异，从理论上证实白藜芦醇的抗氧化反应为 双分子基元反应。计算结果很好的符合并解释了已知的实验活性数据。 对于黄酮类化合物柚皮素、芹菜素、紫杉叶素、槲皮素则使用Gaussian03软件包中 从分子轨道，离解能