Nothch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡中的作用及其机制探讨.pdfVIP

摘要 摘 要 研究背景和目的： 胶质瘤是颅内发病率、病死率最高的一种原发性中枢神经系统肿瘤，具有 侵袭性生长的特性，术后复发率高，且多为致命性。虽然目前临床上采取手术、 放疗、化疗、免疫等手段进行综合处理，胶质瘤的诊治已经取得了很大的进步， 但是脑胶质瘤的总体治疗效果仍然非常差，其发病机制尚不明确，也缺乏特异 性治疗药物。新近的研究表明针对某些细胞信号转导通路的分子靶点靶向治疗 药物的研制是提高恶性肿瘤整体疗效的重要手段之一。Notch信号通路在中枢神 经系统发育、神经胶质瘤的发生发展过程中发挥了关键作用，对胶质瘤细胞的 生长、增殖、凋亡等过程起到决定作用，该途径的异常激活与包括胶质瘤在内 的多种疾病的发生密切相关。细胞凋亡是机体为维持内环境的平衡进行的主动 性细胞死亡过程，受一系列凋亡相关基因的调控。在此过程中Notch信号及其下 游效应物发挥了重要作用，然而目前Notch信号途径的精确调控作用并未阐明， 特别是Notch信号异常激活对肿瘤细胞增殖的影响，以及Notch信号异常活化后 对下游靶基因及凋亡过程的作用并不明确。本实验通过体外培养人脑星形胶质 号系统在人脑胶质瘤U87细胞系增殖与凋亡过程中的调控作用及其可能机制， 为分子水平治疗人脑胶质瘤、抗肿瘤药物的开发提供实验和理论依据。 研究内容和方法： 1、人脑星形胶质母细胞瘤U．87MG细胞株的培养： 恒温箱中生长，取处于对数生长期的细胞进行实验。将细胞分成3组，分别为 rhNF—r．B组、DAPT组以及空白对照组，培养48h后收集细胞进行检测。 2、Notch信号对U87细胞增殖和凋亡过程的影响 增殖活性的影响，倒置相差显微镜下观察U87细胞的形态学变化，流式细胞仪 检测细胞凋亡率。 3、Notch信号调控U87细胞增殖凋亡的机制 摘要 ． 色技术、WesternBlot分别检测各组蛋白的表达，测量各自的总灰度值，定量比 较分析各组蛋白相对灰度值。 4、统计学处理 所有数据均采用mean士SD表示，应用统计学软件SPSSl9．0进行单因素方差 分析，采用卡方检验进行统计学处理，P0．05为具有统计学意义。 结果： MG细胞，RT-PCR法检测结 1、成功培养了人脑星形胶质母细胞瘤U．87 提示Notchl／Hesl信号通路在U87胶质瘤细胞中存在。 2、Notch信号对U87细胞增殖和凋亡过程的影响 MTT检测结果表明，培养24、48、72、96h后，rhNF—v,B组细胞A值分别 的活力，DAPT组和对照组的细胞活力较差，发生了不同程度的凋亡(P0．05)。 通过流式细胞仪检测发现，rhNF．v,B组、DAPT组与对照组细胞的总凋亡率分别 凋亡明显，而rhNF．vd3组细胞凋亡较少，差异有显著性意义(P0．05)。 3、Notch信号调控U87细胞增殖凋亡的机制 Notchl、Hesl、Bcl．2均有表达，其中NotchlmRNA及其蛋白表达量分别为 0．974+0．1 O．578+0．101，Hesl mRNA及其蛋白 1 表达量分别为0．230+0．075和O．726士0．1 量增加，DAPT组表达较少。通过Western 下游靶基因Hesl和抗凋亡蛋白Bcl．2表达明显增多，DAPT组表达明显减少旧 胞凋亡。 摘要 ． 结论： 1、Notchl信号途径在人脑胶质瘤U87细胞中存在，在胶质瘤细胞增殖、存 活过程中发挥重要作用，rhNF．KB诱导后激活Notch信号，DAPT诱导后抑制。 2、Notchl信号在人脑胶质瘤U87细胞株增殖凋亡过程中发挥了重要的调控 诱导后抑制Notch信号，促进U87细胞凋亡，抑制增殖。 3、Notch信号系统调控胶质瘤U87细胞增殖凋亡过程的可能机制：Notchl Bcl．2的表达调控细胞的增殖凋亡。 关键词：人脑胶质瘤细胞；细胞增殖；细胞凋亡；Notch信号通路；No