酶法催化制备生物柴油分析及其脂肪酶的化学修饰.pdf

摘要 摘要 生物柴油是从动植物油脂制备的脂肪酸单烷基酯。作为一种无毒、可生物降 解和可再生的替代燃料，它已受到越来越多的关注。生物柴油的合成方法有很多， 主要分为四种：液相反应、固液相反应、高温高压反应、脂肪酶催化反应。脂肪 酶法合成生物柴油有着其它合成方法不可比拟的优点。该法条件温和，醇用量小、 无污染排放。另外，用脂肪酶作为催化剂制备生物柴油，反应过程不受原料中水 和游离酸的影响。脂肪酶是一种作用于油水界面上的水解酶，其底物油脂在水中 不易分散，需借助于有机溶剂才能溶解，而酶暴露在有机溶液中容易失活。现有 二种方法可避免酶直接暴露于有机溶液中：一是采用反胶束的方法，二是酶的化 学修饰。脂肪酶的化学修饰不仅可以确定酶的功能基团，使底物和酶更容易发生 接触，从而提高反应速度，而且在提高酶的稳定性，延长酶失活的半衰期，提高 催化活性，甚至创造新的催化功能等方面都有重要意义。 本文主要利用气相色谱作为检测手段，研究生物酶催化合成生物柴油过程中 的最优化条件，探讨双底物酶催化酯交换反应的动力学机理，并对猪胰脂肪酶进 行表面活性剂修饰，研究化学修饰对酶的催化性能的影响。主要分为以下三部分： 第一部分内容是讨论醇油比、有机溶剂种类、有机溶剂体积、反应温度、酶 种类、酶用量等条件对合成生物柴油的影响，并选取一个合适的反应条件作为本 实验研究的催化生物柴油的体系。实验结果表明，当醇油比为3．25：1，有机溶剂 选用叔丁醇，并使其与油的体积比为0．8：1，反应温度40℃～45℃，使用 Novozym435催化，并使其与油的质量百分比为2％时，测得的生物柴油的产率 最高。 第二部分内容是在适当的反应条件下，研究双底物酶催化酯交换反应动力学 性质。通过推导出来的反应速率方程，用Origin软件拟合实验曲线得到了相应 的动力学常数，并结合Arrhenius公式得到相关的热力学常数。实验结果表明， 有机相酶催化酯交换反应过程分两步进行，第一步反应是甘油三酸酯与脂肪酶形 成酰基化酶复合物，其活化能大于第二步反应，即酰基化酶与甲醇的反应。并且， 随着温度的升高反应速率随之增大，但增大的幅度逐渐减小，即温度越高，反应 速率对温度越不敏感，其主要原因是甘油三酸酯与脂肪酶形成酰基化酶复合物过 摘要 程和酰基化酶与甲醇反应过程的活化能均较小，所以提高温度对反应速率的影响 不是很大。 第三部分内容是采用吐温80作为修饰剂，甲醛作为偶联剂，在不同的pH条件 下，对猪胰脂肪酶进行化学修饰，然后改变温度条件，考察化学修饰前后的猪胰 脂肪酶对大豆油及甲醇的酯交换反应的催化效果。实验结果表明，化学修饰的最 佳pH条件为7．0：经过化学修饰的猪胰脂肪酶比未修饰酶的催化效率明显提高： 当催化反应的温度为45℃时，生物柴油的产率最高。 关键词：生物柴油；酶修饰：反应动力学 Ⅱ Abstract Abstract Thebiodieselisthe acidesterwhichismadefromanimalfator monoalkylfatry as kind the oil．Itismoreandmoreconcerneda ofinnocuous， vegetable are methodsforbiodiesel andrenewablealternativefuel．There biodegradable many bedividedintofour synthesize，mainly species：liquidphase under