IGF-1和LY294002对NSCLC中CDH1蛋白表达及其细胞定位影响研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………5 二、英文缩略语………………………………………………………………………9 三、论文 前言……………………………………………………………………………10日IJ蟊……………………………………………………………………………10 材料与方法……………………………………………………………………11 结果……………………………………………………………………………14 讨论……………………………………………………………………………20 结论……………………………………………………………………………24 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………25 五、参考文献…………………………………………………………………………26 六、附录 综述……………………………………………………………………………30 在学期间成绩…………………………………………………………………39 致{射……………………………………………………………………………40 个人简介……………………………………………………………．．：………41 ·中文论著摘要· 胞定位影响的研究 目 的 肺癌是一种高发病率的肿瘤，并且已成为癌症死亡的主要原因，有资料显示， 2000年以来我国的肺癌的发病率呈显著上升的趋势，目前我国每年的肺癌死亡人 数可达60万，居所有恶性肿瘤之首，其中，超过75％的是非小细胞肺癌(non．small cell 5年生存率只有15％，疗效进展十分缓慢。因 lungcancer，NSCLC)，NSCLC 此，对NSCLC发病机制及其预防对策的研究具有十分重要的意义。SCF (Skpl-Cull-F-boxprotein)和后期促进复合体／周期体(anaphasepromotingcomplex， 在细胞周期的不同时相活化而发挥作用，从G1期一直延续到S期末，SCF显示 活性，从M期的中期到G1／S期过渡，APC／C发挥重要作用【12】。S期激酶相关 kinaseassociated 蛋(a2(S-phase protein 的一种F-box蛋白，为SCF型泛素连接酶的靶蛋白识别组分，以细胞周期依赖 的形式在G1晚期开始出现，S／G2期高表达，M期迅速下降，通过对CKI的 泛素化降解而促进细胞周期G1／S期转换及S期的发展。许多研究表明，SKP2 在多种人恶性肿瘤中表达增高，与多种肿瘤如乳腺癌、结肠癌、肺癌等的发生、 发展及预后密切相关，被视为癌蛋白13,41，可作为研究抗肿瘤药物的新靶点。CDC20 同源蛋白1(CDC201，CDHl)是APC／C的激活因子之一，在有丝分裂 homolog 出有丝分裂期进入G0／G1期【51。 P13尉Akt信号通路是细胞中调控细胞生长增殖的极为重要的途径，该通路的 过度激活将导致肿瘤发生。研究表明，P13K／Akt通路可通过多种分子机制调控S 期激酶相关蛋白．2(SKP2)蛋白的表达161。本课题组前期实验结果表明肺癌细胞中 但其确切的分子机制尚不清楚。许多实验表明，CDHl可以靶向降解SKP2，使 细胞处于G1期，防止未成熟的细胞过早的进入S期。但CDHl是否在 P13K／Akt对SKP2的调节中发挥作用并且其调节机制如何还不甚明了。 P13ⅪAkt．CDHl．SKP2信号转导轴，及其可能存在的调控机制。 方法 传代培养。 2、细胞分组，将生长至70％汇合度的细胞分组，处理组1加入P13触t 入等体积的DMSO，作用24h后收集细胞。 殖情况，并绘制生长曲线，筛选LY294002、IGF．1的最佳作用时间和作用浓度。 4、应用流式细胞术检测A549、LK2及H460三种细胞中对照组及处理组细 胞周期变化。 CDHl蛋白的表达变化。 实验组定位变化。 7、应用核质分离方法检测A549、LK2及H460三种细胞中对照组及实验组 胞核和胞质中CDHl蛋白的表达变化。