血小板活化和兔VX2移植瘤相关性研究.pdf

■ 摘 要 目的：对兔VX2肝移植瘤不同时期外周血中血小板活化标志物 CD62P表达水平进行监测、比较，观察血小板活化标志物CD62P表达水 平的变化以及血小板活化与血栓形成、肝癌的发生、发展、浸润、转 移之间的关系，探讨肿瘤细胞与血栓形成、血小板活化之间的相关性， 及血小板活化在肝癌病程进展、血行转移中的重要作用，为临床肝癌 的诊断、治疗、病情评估及预后等方面提供更多的理论依据，从血液 学角度寻求抗癌治疗新靶点，进一步提高肝癌患者的临床诊治水平， 延长肝癌患者的寿命，提高肝癌患者的生活质量。方法：1．将健康 新西兰大白兔共90只，随机分为：①肝移植瘤模型组30只；②假手术 组30只；③正常对照组30只；2．兔VX2肝移植瘤瘤株的复苏：从负氮瓶 中取出兔VX2瘤株(瘤株由第四军医大学唐都医院动物实验中心提 供)，置于恒温箱中水浴复苏，复苏温度约为25—28。C，5分钟后取出 复苏的瘤株，置于无菌玻璃器皿中，加入3ml含2万u庆大霉素的生理 盐水，在无菌箱中将瘤株剪成1-2ram3大小的碎块，混匀制成混悬液备 用；3、荷瘤兔的制备：选健康新西兰大白兔2只，固定于动物台上， 选右侧臀部作为注射点，脱毛、常规消毒注射点皮肤后，用18G针头 注入lml备用的瘤细胞混悬液，拔针后压迫5分钟，防止瘤细胞混悬液 从穿刺道溢出，保证瘤株种植成功。荷瘤兔种植1周后，观察荷瘤兔 存活，触摸其右侧臀部已长出直径约2cm大小的包块，荷瘤兔制备成 功：4、瘤细胞混悬液的制备：准备切开荷瘤兔臀部肿瘤组织，制备 瘤细胞混悬液，进行传代转种。用速眠星II号将荷瘤兔全麻，无菌条 件下剥离肿瘤，切开瘤体，取靠近包膜的灰白色鱼肉样组织置于生理 盐水(含庆大霉素2万U)中，剔除坏死组织及纤维组织，将瘤组织剪 液备用。5、兔VX2肝移植瘤模型建立选健康新西兰大白兔30只由背 部脊柱旁皮下注射速眠星II号lml，观察实验动物麻醉成功。将其仰卧 位固定于动物台上，取上腹部剑突下正中线处为切口选择处，局部脱 毛、常规消毒后切开皮肤，切口长约3cm左右，逐层分离皮下组织， 打开腹腔，暴露肝脏。轻柔将肝脏拉出，用18G针头在肝脏左叶注入 瘤细胞混悬液lml，进针深度约2cm左右。拔针后用明胶海绵填塞、压 迫穿刺道5分钟，回纳肝脏，逐层关腹。依次成功种植兔VX2肝移植瘤 模型30只；6、假手术组的建立选健康新西兰大白兔30用上述同样 方法麻醉后，仰卧位固定于动物台上，取上腹部剑突下正中线处为切 口处，局部脱毛、常规消毒后切开皮肤，切口长约3cm左右，逐层分 离皮下组织，打开腹腔，暴露肝脏。轻柔将肝脏拉出，在肝脏左叶用 18G针头注入生理盐水lml，进针深度约2cm左右。拔针后用明胶海绵 填塞、压迫穿刺道5分钟，回纳肝脏，逐层关腹，依次成功操作假手 组兔子30只；7、正常对照组30只健康新西兰大白兔未进行任何干预 作为对照；8、采用流式细胞术(FCM)分别于瘤株种植前、瘤株种植 后6h、48h、1w、2w采各组实验动物外周血，检测血小板活化标志物 CD62P表达水平，比较兔肝移植瘤模型组不同时间外周血血小板活化 标志物CD62P表达水平的变化，观察各组实验动物血液循环中CD62P 表达水平的差异，分析转移组与无转移组CD62P表达水平的不同，所 得数据用均数±标准差(x±S)表示，两样本均数比较采用成组设计的 t检验，以PO．05为差异有统计学意义。9、在瘤株成功种植后1w、 2w各组分别处死并解剖15只实验动物，肉眼观察肝脏、肺内有无转移， 观察静脉内有无血栓形成；检测转移组与无转移组外周血血小板活化 标志CD62P的表达水平，比较转移组及无转移组间血小板活化标志物 表达水平的不同；分析有血栓形成组与无血栓形成组外周血小板活化 标志物表达有无差异。结果：1、瘤株种植前各组外周血血小板活化 标志物呈低表达状态，各组均数对LLP值分别为0．083△0．i0▲0．0880， 组间对比无明显差异；2、瘤株种植后6h假手术组、肝移植瘤模型组 外周血血小板活化标志物CD62P表达水平增加，假手术组与正常对照 组比较P=O．Ol，肝移植瘤模型组与正常对照组比较P=O．012，差异均有 统计学意义；肝移植瘤组与假手术组对比P=O．084，组间对比无明显 变化；3、瘤株种植后48h，假手术组与正常对照组比较P=O．023，肝 t 移植