聚合度1115大环糊精的制备分离和包合功能的研究.pdf

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摘要 摘要 环糊精是淀粉经酶降解环化后的产物,其具有内疏水外亲水的筒状结构, 可以与多种分子形成包合物,从而改变客体分子的特性,因而在食品、医药、 化工及轻工等领域得到了广泛的应用。然而目前市场上得到广泛应用的只有c【.、 p.和1,.环糊精及其衍生物。对于聚合度大于9的环糊精的应用几乎没有,这主要 是受到其产量的限制,另外对于大环糊精的性质知之较少也影响了其应用的开 发。为此,本文从大环糊精合成酶的性质、合成条件的优化、单一聚合度(聚 合度11.15)的分离及包合性能进行了分析研究。主要研究结果如下: 1。以直链淀粉为底物,分析研究了底物浓度、酶量、温度、pH、麦芽糖、 乙醇、二甲基亚砜对反应转化率的影响,结果表明底物浓度过高和过低都会使 转化率下降,而酶用量对最终转化率影响不大,最适转化pH值是6.5,最适转 化温度是40℃,麦芽糖对环糊精的合成起抑制作用,乙醇和二甲基亚砜能通过 抑制麦芽糖转糖基酶的歧化反应提高转化率。 2.以高含量直链玉米淀粉为底物,借助design.expert软件,通过 Plackett.Burman设计方法从7种可能影响大环糊精转化率的因素中筛选出三个 最为重要的影响因素,分别为酶用量、反应温度和反应时间。在底物淀粉浓度 为10 mg/mL和反应体系的pH、乙醇、DMSO添加量分别为6.5、8%、15%的条 件下,采用最陡爬坡实验寻找响应面实验的中心点,结果表明最优中心点为酶 用量20 h。进一步采用Box.Benhnken U/g淀粉、反应温度38℃、反应时间10 设计相应面方法分析,得出回归方程存在最大值点,此时酶用量20.8 U/g淀粉、 反应温度37.5℃、反应时间10.3h,在此条件下实际测得转化率为29.62%,与 预测值29.20%基本接近,比优化前转化率提高81.05%。 3.采用沸水浴灭活,离心除蛋白,5倍体积乙醇沉淀,经真空干燥后制得 cmxl.2cm 大环糊精粗品,其回收率约为46%。用一根160 i.d.的Bio.GelP.4柱 cmxl.2cm 分离可得到纯度66%.71%的大环糊精单体(聚合度11.15),用一根18 1.15)。 i.d.的硅胶柱分离可得到纯度84%.92%的大环糊精单体(聚合度1 4.分析研究了B.环糊精及聚合度为11.15的大环糊精对苯甲酸和3,5.二硝 基水杨酸的包合作用,结果表明p.环糊精和聚合度11.15的大环糊精环糊精对苯 摘要 甲酸和3,5.二硝基水杨酸有一定的包合能力,包合结果使得苯甲酸和3,5.二硝 基水杨酸的最大吸光值分别从228nm跃迁到293nm和从335nm跃迁到455rim: 1.1 B.环糊精和聚合度1 5的大环糊精在浓度O.3.5mM和0-0.5mM内的相溶解度 曲线属于AL型,计算得B.环糊精、聚合度11.15的人环糊精对苯甲酸和3,5.二 M~、43M~、41M~、48M~、53M~、52Mo 硝基水杨酸的包合常数分别为215 M~、156M~、173M~、200M~、220M~、207 和296 M一,其中p.环糊精的包 合常数最大,聚合度在11.14之间大环糊精的包合常数随聚合度增大而增大,当 聚合度15时包合常数又变小。 关键词:大环糊精、麦芽糖转糖基酶、制备、分离、包合 II ABSTRACT

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