小麦种子储藏蛋白基因的分子鉴定和进化的研究.pdf

小麦种子储藏蛋白基因的分子鉴定与进化研究 摘 要 小麦种子储藏蛋白是人类最主要的植物蛋白来源，与小麦的面粉加工品质密切 相关。高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)是小麦种子胚乳中最重要的储藏蛋白之一。 HMW-GS的结构与等位变异组成是小麦面粉加工品质最主要的决定因素。六倍体普 通小麦中HMW-GS的等位变异类型相对有限，而在普通小麦的近缘物种中存在丰富 的等位变异类型。因此，从近缘物种中发掘新型高分子量谷蛋白基因成为普通小麦 品质改良新基因的重要来源。利用SDS．PAGE方法，从一份新疆稻麦材料稻麦一2 泳图谱中具有独特的电泳迁移率，在普通小麦中没有该亚基报道，并利用PCR克隆 的方法对这一亚基组合的编码基因进行分离，并进行体外表达。HMW-GS lAy基因 具有在普通小麦中完全不表达的特性，而不同于其他等位基因。但是关于lay基因 沉默的机制，还未有准确的结论。本研究从乌拉尔图小麦、野生一粒小麦、栽培二 粒小麦(栽培二粒)中不同类型的lAy亚基基因编码区和启动子调控区序列进行了 克隆和比较分析，并对25个小麦族二倍体物种高分子量谷蛋白启动子进行了鉴定， 综合这些结果，分析了IAy基因沉默的机制。此外，对这些二倍体物种的启动子调 控元件结构特征进行了分析，并以鉴定的启动子序列进行了二倍体物种的系统进化 分析。113L．1RS易位系因其优良的抗病性和对不良环境适应能力，广泛应用于小麦生产 和育种工作中，但1BL／1RS易位系存在面团弹性弱和强度比非易位系显著下降等加 麦品质下降的主要原因。关于∞．secalins的研究的报道仍然很少，本研究对其不同R 染色体相关物种的∞-secalins进行了研究。取得的主要研究结果如下： 1．通过SDS．PAGE分析，表明新疆稻麦高分子量谷蛋白亚基组成包括4个表达 的迁移率低于亚基1Dyl0，但比亚基1By9快。利用一对扩增高分子量谷蛋白亚基基 因完整编码区的引物，对新疆稻麦材料稻麦．2的总DNA进行扩增，获得大小分别为 1．8、l。97、2．2和2．5 kb的4条片段。将4条片断分别克隆、测序和进行序列比较后， 确定大小为2．5kb的片段是高分子量谷蛋白亚基1Dx2．1的基因编码区，命名为 1Dx2．J『；而1．97 推导的氨基酸一级结构都由保守的N．末端、C末端和较长的中部重复区组成。1Dx2．J 基酸残基。两个亚基都含有保守的半胱氨酸残基数目和位置分布，具有高分子量谷 蛋白亚基的典型特征。根据推导的N．末端和C末端氨基酸序列进行聚类，结果1Dx2．』 和1DylO．Jf与普通小麦D基因组编码的x和Y型高分子量谷蛋白亚基分别聚为一类。 tasuchii)的1Dx2．』‘表现出较 1Dx2．』与来源于二倍体山羊草属物种节节麦(Aegilops 近的亲缘关系。 2．利用SDS．PAGE从普通小麦的近缘物种乌拉尔图小麦、野生一粒小麦和栽培 二粒小麦和硬粒小麦等141份材料中鉴定出53份材料具有表达的lay亚基，频率为 亚基和1Bx7都慢，接近于1Dx2亚基。由此，该亚基具有较大的分子量，具有相似 电泳迁移率的Y型高分子量谷蛋白亚基还未见报道。 根据这些结果，选择了9份材料用做进一步的克隆分析，获得的lay基因大小 个氨基酸组成，比目前其他所有已知的Y型亚基的分子量部大。根据氨基酸序列比 对的结果表明，lay(Ta-e3)与其他亚基分子量差异主要是由于重复区重复单元数目的 个九肽，导致123个氨基酸的增加。本研究发现，在野生小麦中重复区末端保守的半 lAy(Ta-s)和lay(Td-s)@翻译被编码区的终止密码子提前终止。 来源于不同物种的沉默的和表达的lay亚基启动子进行比对分析表明，所有的lay 亚基启动子区序列表现出高度的相似性，仅不同于一些个别碱基的替代、插入和缺 motif,E enhancer和TATAbox具有高度的保 失(图3．4)。调控元件N motif,complete II 体，四倍体和六倍体小麦)不同表达类型(沉默的和表达的)的lay亚基启动子区序 列中都