大环内酯类抗菌药对流感嗜血杆菌生物被膜的影响.pdf

军医进修学院博l‘论文 阿奇霉素对流感嗜血杆菌生物被膜的影响 中文摘要中父捅要 细菌生物被膜(bacteriabiofilmBBF)n-T减弱细菌对抗菌药的敏感性，降低 膜内药物的有效浓度，导致细菌不能彻底清除，疾病反复发作。慢性阻塞性 obstructive diseases 肺疾病(chronic pulmonaryCOPD)是临床常见的呼吸道疾 病，居全球死亡原因的第4位。慢性阻塞性肺疾病急性发作(Acute Explosion ChronicObstructive Diseases PulmonaryAECOPD)感染的特点是慢性过程急性反 复发作，与BBF相关感染特点极其相似。流感嗜血杆菌是是导致AECOPD 的主要致病菌之一．研究证实流感嗜血杆菌可在体外建立生物被膜，并逃逸 抗菌药及免疫系统的攻击，提示流感嗜血杆菌BBF与AECOPD等慢性疾病 associated VAP)的发病率和死亡率均较高。气管导管生物被膜感 pneumonia 染是导致VAP的原因之一． 目的：本实验通过建立流感嗜血杆菌体外和慢性支气管炎大鼠体内及气 管导管生物被膜模型，并给予不同浓度大环内酯类抗菌药(红霉素、罗红霉 素、阿奇霉素)干预，探讨大环内酯类抗菌药对流感嗜血杆菌生物被膜的影 响。 方法：通过结晶紫染色及扫描电镜鉴定体外建立流感嗜血杆菌生物被膜； 通过结晶紫染色评价不同浓度大环内酯类抗菌药物对流感嗜血杆菌早期生物 被膜形成的影响及对成熟生物被膜的破坏作用，以筛选出抑制作用好的药物； 通过扫描电镜观察药物对生物被膜基本结构的破坏；通过菌落计数观察药物 对生物被膜内细菌的抑制作用。通过熏烟结合脂多糖气道内滴入法建立慢性 支气管炎大鼠模型；通过琼脂珠包被菌体气道滴入法建立慢性支气管炎大鼠 流感嗜血杆菌急性感染模型；通过肺泡灌洗液、肺组织匀浆菌落计数及扫描 电镜、病理切片观察慢支急性发作大鼠肺内生物被膜的形成；通过肺泡灌洗 液、肺组织匀浆菌落计数和大鼠肺泡灌洗液及血清中TNF．a、IL一6、IL一8水 平的变化，评价阿奇霉素灌胃治疗流感嗜血杆菌感染慢支大鼠的作用。并评 价各炎性因子在慢支急性发作中的地位。采用慢性支气管炎大鼠气管置管， 3 军医逃修学院博I：论文 给予细菌气道滴入流感嗜血杆菌造成气管插管感染模型，并在扫描电镜下观 察气管内导管生物被膜形成情况。通过气管导管菌落计数评价阿奇霉素在治 疗气管导管生物被膜的作用。 结果：通过结晶紫染色及扫描电镜证实体外成功建立流感嗜血杆菌生物被 膜；通过结晶紫染色观察到，流感嗜血杆菌在亚MIC浓度仍可形成生物被膜， 大环内酯类抗茵药对生物被膜有一定抑制作用。其中在对早期生物被膜抑制 作用的观察中，阿奇霉素组随药物浓度的增高形成的生物被膜的能力减弱， 但同样为大环内酯类抗菌药物的罗红霉素和红霉素组，在1／8MIC浓度时形 成生物被膜的能力较其它浓度为高(PO．05)，甚至高于无药对照组；在对成 熟生物被膜破坏作用的结果显示，阿奇霉素组随药物浓度的升高对生物被膜 的破坏力越强，并且，亚MIC的阿奇霉素对成熟生物被膜也显示出了一定的 破坏作用。通过扫描电镜及菌落计数进一步观察阿奇霉素对生物被膜影响的 结果显示阿奇霉素可破坏生物被膜的基本结构，使被膜表面粗糙、结构疏松， 并且在1／8MIC～8MIC浓度可不同程度的抑制生物被膜内细菌数，但是在 8MIC时仍未能彻底清除膜内细菌。慢性支气管炎模型组动物的气道组织病 理学可见支气管黏膜上皮纤毛倒伏、脱落、管腔分泌物增多、炎细泡浸润、 杯状细胞增生、平滑肌断裂。对照组气道黏膜上皮完整，纤毛无黏连，脱落， 未见炎细胞浸润。对照组和慢支组大鼠肺泡灌洗液和肺组织匀浆细菌数在第 一天时接种数均为10‘7以上，病理显示对照组肺泡腔，气管旁及肺间质均出 现大量炎细胞浸润，以中性粒细胞浸润为主，肺组织呈实变；慢支组肺泡腔 及肺间质大量炎细胞浸润，炎细胞在淋巴细胞浸润的基础上出现中性粒细胞， 且肺泡腔渗出明显，部分呈实变；提示急性感染模型成功建立。慢支组肺组 织匀