不同分离纯化法建立人早孕滋养细胞模型的效果比较.pdf

广东医学 2015年3月第36卷第5期 GuangdongMedicalJournalMar．2015，Vo1．36，No．5 · 665 · 不 同分离纯化法建立人早孕滋养细胞模型的 效果比较米 左彦珍 ，胡亚涛 ，李玉红 ，许倩。 承德 医学院 ’药理学教研室，病理学教研室，基础研究所 (河北承德067000) 【摘要】 目的 对4种建立滋养细胞的方法进行比较，以期寻求一种简便高效的人早孕滋养细胞的体外培 养方法，为相关研究提供基础。方法 早孕绒毛通过胰酶联合胶原酶消化分离后，分别采用直接接种、差速贴壁 联合差速消化法、人外周血淋巴细胞分离液分离纯化法、完整绒毛消化联合简化的percoll密度梯度分离法4种方 法纯化培养，倒置显微镜观察细胞形态，应用HE染色、免疫组化和免疫细胞化学法检测细胞纯度。结果 直接接 种、差速贴壁联合差速消化法、人外周血淋 巴细胞分离液分离纯化法得到的细胞细胞角蛋 白7(CK一7)表达阳性 率不足 60％；简化的percoll密度梯度分离法得到的细胞 CK一7表达阳性率达 90％以上。结论 完整绒毛消化联 合简化的percoll密度梯度分 离纯化可以得到大量较高纯度的滋养细胞 以供后期实验。 【关键词】 早孕滋养细胞；原代培养；胎盘；人外周血淋巴细胞分离液；percoll密度梯度；差速；细胞角蛋 白 一7 Isolationandcultureoftrophoblastcellsfrom human placentainfirsttrimesterwith differentmethods· ZUO Yah—zhen ，HUYa—tao，LIYu—hong，XUQian． DepartmentofPharmacology，ChengdeMedicalUniversity，Cheng- de067000，China Correspondingauthor：LIYu—hong．E—mail：120950413@ qq．corn A【bstract】 Objective Tostudythemethodologyforpurificationofhumanfirsttrimestertrophoblastcellsfrom placentaswithdifferentmethods，thustoseekasimplemethodforpurificationofhumanfirsttrimestertrophoblastcellsin vitro．M ethods Targetcellsisolatedfrom firsttrimesterhumanplacentawithtrypsinandcollagenase 1wereincubated directly；purifiedbydifferentialtimeattachmentapddigestion；purifiedbylymphocyteseparationmedium ；anddissociated intrypsin／collagenase1withpurificationbysimplifiedpercollgradientcentrifugation，respectively．Morphologicobserva— tionwasappliedwithinvertedphasecontrastmicroscope，withpuritywasassessedbyHEstainingandimmunocytochemis— try．Results Cytokeratin一7positivecellsweremorethan90％ onlywiththelastmethod，whilecytokeratin一7positive cellswerelessthan60％ withtheothermethods．Conclusion Firsttrimesterhumantrophoblastcellscanbeobtained throughwholefirsttrimesterhumanplacentadigestionandfollowedbysimplifiedpercollgradientcentrifugationpurification． K【eywords】 firsttrimestertrophoblast；primarycellculture；placenta；lymphocyteseparationmedium；percoll； cytokeratin一7 人类胚胎的成功着床、胎