微生物实验第二次课.ppt

第二次实验课 内 容 1.细菌培养法（录象） 2.基础培养基制备（讲解示教） 3. 细菌接种法（一份/组）讲解 4.人体、物品中细菌检查（一份/组）讲解 5.飞沫、空气中细菌检查（一份/桌）讲解 6.观察细菌代谢产物（讲解） 7. 第一次实验报告评讲 基础培养基的制备 去筋膜黄牛肉绞碎500g加入1000ml蒸馏水 调整酸碱度至pH 7.6 过滤，补足失水 重新校正pH一次 分装，高压灭菌， 15磅（121.3℃）15～20分钟 检菌如无细菌生长 （液体透明）即可应用 脱脂纱布过滤，按比例加入1％蛋白胨、0.5% NaCl，0.1%K2HPO4加热溶解补足水至1000ml 直接煮沸2小时 4℃浸泡过夜煮沸半小时 按物理状态不同分为：液体培养基、固体培养基、半固体培养基 按营养成分分如下： 人体、物品中细菌检查 材料：普通平板 （1份/组） 盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。 飞沫、空气中细菌检查 材料：血平板 （1份/组） 距口15—20cm 用力咳嗽三次 置空气中 （避日光照射） 30分钟 飞 沫 空 气 盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。 细菌培养接种法——平板划线法 菌种：混合菌液 材料：普通平板 用具：接种环 方法：分区划线 1区 2区 3区 4区 原始区域 半固体培养基 斜面培养基 细菌培养接种法--斜面接种、液体接种、半固体 菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面 材料：斜面、液体、半固体培养基 用具：接种环、接种针 液体培养基 结果观察——固体培养基 血平板 普通平板平板 菌落大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况 斜面培养基 结果观察——普通平板 普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。 结果观察——斜面培养基 大肠埃希菌：形成的菌苔生长现象 菌落(colony)：单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团 菌苔(mossy): 指细菌生长繁殖后，在培养基表面形成的一层培养物，由多个菌落紧密排列而形成的细菌培养物。 结果观察——血平板 表葡: 形成不溶血的菌落。 甲型溶血性链球菌: 形成α溶血现象 or 甲型溶血现象 or 草绿色溶血现象，属于不完全溶血。 金葡: 形成β溶血现象 or 乙型溶血现象，属于完全溶血。 结果观察——半固体培养基 1、 扩散生长：具有动力的细菌,可见培养物扩散和培养基变混浊。 即有鞭毛的细菌：由穿刺线向外扩散生长（羽毛状或云雾状） 2、原位生长：没有动力的细菌，可见培养物没有扩散，培养基仍然澄清。 即无鞭毛的细菌： 沿穿刺线生长 2 1 1 2 结果观察——液体培养基 细菌代谢产物观察 糖发酵试验 吲哚（indol）试验 甲基红（methyl red）实验 VP（Voges-Proskauer）试验 枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 尿素酶试验 硫化氢试验 细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样，产生的代谢产物也不一样，常见 糖发酵试验 不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同 葡萄糖 大肠杆菌 丙酮酸 甲酸 CO2+H2 葡萄糖 变形杆菌 丙酮酸 甲基红(Methyl red)实验 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 甲基红 - 葡萄糖→丙酮酸 甲基红 + 吲哚（indol）试验 I-吲哚（indol）试验 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑ 对二甲基氨基苯甲醛 枸橼酸盐利用试验 C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 利用枸橼酸盐生长 + 不能利用 - 硫化氢试验 硫化氢试验（醋酸铅培养基） 某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等），则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而呈黑色为（＋）。 尿素酶试验 产生氨使培养基变碱，指示剂显红色，为阳性。如：变形杆菌为阳性。 IMViC试验 I - 吲哚（indol）试验 M - 甲基红（methyl red）试验 V - VP（Voges-Proskauer）试验 C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 IMViC试验 I M Vi C试验 大肠埃希菌 + + - - 产气杆菌 -