沉默FRAT1基因对结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究.pdfVIP

中国实验诊断学 2014年 2月 第 18卷 第 2期 — 195 ～ 文章编号：1007—4287(2014)02—0195—05 沉默 FRAT1基因对结肠癌 HT一29细胞增殖 。 与凋亡的影响及其机制研究 王苏雅 ，于庆功 ¨，谷 伟 ，张欣欣 ，杨子荣 ，李文哲 (1．大连大学附属中山医院消化 内科 ，辽宁 大连 116001；2．大连大学生命科学与技术学院免疫研究所 ，辽宁 大连 116622) 摘要：目的 探讨沉默 FRAT1基因对结肠癌 HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其可能分子机制。方法 将成功 转染FRAT1基因RNA干扰序列的人结肠癌HT-29细胞扩大培养，MTT 比色法检测细胞增殖，双染流式细胞术检 测细胞凋亡率 ，单染流式细胞术分析细胞周期 ，免疫荧光法激光共聚焦显微镜下观察 ~-catenin蛋 白变化。结果 转 染组细胞较对照组细胞生长明显减缓 (PO．01)，凋亡率明显增加 (PO．01)，细胞周期出现Go／a 期阻滞，差异显 著 (PO．01)，胞质 ~l-eatenin蛋 白表达 明显下调 。结论 FRAT1基 因RNA干扰序列可以有效诱导结肠癌 HT-29细 胞凋亡和细胞周期阻滞，抑制细胞增殖 ，其机制可能通过下调 catenin表达实现。 关键词 ：结肠癌 ；FRAT1；~]-catenini增殖 ；凋亡 中图分类号：R735．3 5 文献标识码 ：A Ef~ctofFRAT1geneSilencingonproliferationandapoptosisofColoncancerHT-29 cellsandpossiblerelevantmechanism WANGSu—ya ，yUQing—gong ，GUWei，eta1．(1．DepartmentofGastroenterology，Affiliatedhospitalof DalianUniversity，Dalian116001，China；2．ImmunologyInstitute，LifeScie．nceandB08c oZ0g CollegeofDalian University，Dalian116622，China) Abstract：Objective ToinvestigatetheinfluenceofFRAT1geneontheproliferationandapoptosisofhumancolon cancercelllineHT一29cells，andexploreitsunderlyingmoleculemechanism ．Methods Flow cytometrywithAnnexin V-FITC／PIdoublestainingwasemployedtodetectcellapoptosis，andthechangesinthecellcycleandproliferationof thecellswereexaminedwithflow cytometrywithPIstainingandMTT colorimetricassay，respectively．p_cateninpro— teinlocalizationwasdetectedbyindirectimmunofluorescence．Results FRAT1siRNA couldrestrainHT-29cellprolif— eration，increaseGo／a1phasecellratio，inducetumorcellapoptosis(PO．01)．Theexpressionof~-cateninatthecyto— plasm wasdownregulatedandinhibitthetranslocationintonucleus，Conclusion FRAT1siRNA effectivelyinhibitsthe expressionofHT一29cells，andsuppressescellgrowthandimprovescellapoptosisbyupregulatingtheexpressionsof8一 catenin．