甲状腺髓样癌人源噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定.pdfVIP

重庆医科大学学报2015年第 4O卷第 9期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2015．Vo1．40No．9) 一 1199 一 DOI：10．13406~．cnki．cyxb．000656 甲状腺髓样癌人源噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定 刘 琼，庞 华，奚级梅，李文波，许 璐 (重庆医科大学附属第一医院核医学科，重庆 400016) 摘【 要】目的：从大容量甲状腺髓样癌(medullarythyroidcarcinoma，MTC)人源噬菌体单链抗体(singlechainvariablefragments， scFv)库中筛选出特异的抗 MTC单链抗体，并对其生物学特性进行鉴定。方法：分别以甲状腺上皮细胞TEC细胞株和MTC细胞 订 细胞株为抗原进行5轮 “吸附一洗脱一扩增”的富集循环，筛选出抗MTC抗体，将筛选出的阳性克隆感染E．coliHB2151；异丙 基一p—D一硫代吡喃半乳糖苷 (isopropyll3一D一1一thi0galactopymnoside，IPTG)诱导抗体可溶性表达，HiTrapMTAntiE—tag柱纯化表达 抗体 ：SDS—PAGE和 Westernblot检测抗体表达和相对分子质量 ；ELISA检测可溶性 seFv的特异性和免疫活性，分为 町 细胞 组 、SW480细胞组 、TEC细胞组和 PBS空白对照组 ，分别检测各组在酶标仪 A 处的吸光度 ；四甲基偶氮唑盐 比色分析法 (methylthiazolyltetrazolium，MYr)分别检测 1Tr细胞组、SW480细胞组与不同浓度svFv反应并读取A 处的吸光度，设置空白 对照PBS组，分别计算细胞抑制率。结果：5轮筛选后 ，抗体得到了明显富集。随机挑取单个细菌克隆，phageELISA和scFv ELISA阳性率分别为65％和50％。SDS—PAGE、Westernblot结果显示MTC特异性抗体分子量为28kD左右。ELISA结果显示， rrr细胞组的吸光度 (O．41±0．12)较 sw480细胞组 (O．20±0．03)、TEC细胞组(0．13±0．O1)、PBS空白对照组 (0．07±0．O1)明显增 加 (P=-0．000)。M1Tr法结果显示，1Tr细胞组和SW480细胞组在 scFv浓度为0．1、1、10Ixmol／L时，2细胞株间抑制率有统计学意 义，统计量分别是t=2．881，P=-0．02；t=5．073，P=0．006；t=7．324，P=0．000，且在 scFv浓度为 10 mol／L时，对r丌细胞的抑制率最高 (0．59-40．15)％。结论：利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性的抗 MTC人源单链抗体。 【关键词】噬菌体抗体库；人源单链抗体；甲状腺髓样癌；筛选 【中图分类号】R392．11；R446．62；R736．1 文【献标志码】A 【收稿日期]2015—01—07 Screeningandpreliminaryidentificationofhumansinglechainvariable fragmentsantibAiesagainstmedullary thyroidcancer LiuQiong，PangHua，XiJimei，LiWenbo，XuLu (DepartmentofNuclearMedicine，TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity) A【bstract]Objective：Toisolatesinglechainvariablefragments(scFv)antibAiesa·gainstmedullarythyroidcarcinoma(MTC)froma largehumanphagedisplaylibrary andtoidentifythebiologicalactivityofpositiveclones．Methods：Thyroidepithelialcellline(TEC cel1)andMTCcellline(TFcel1)