UDPG%3a甜菊糖苷葡萄糖基转移酶cCNA的克隆与序列研究.pdfVIP

UDPG：甜菊糖苷葡萄糖基转移酶eDNA的克隆和序列分析 摘 要 甜菊是一种新型的糖源作物，因其叶片细胞内可合成多种高甜度、低热量、 无毒性、性质稳定的甜菊糖苷而日益受到重视。 由于甜菊糖昔的积累与UDPG：甜菊糖苷葡萄糖基转移酶直接相关，因此， 增加UDPG：甜菊糖苷糖基转移酶的表达量将有助于增加糖苷的产量及改善商品 糖苷的口味。 建了甜菊叶片非表达cDNA文库。根据与植物次生产物糖基化有关的UDPG：葡萄 CAT AA ACA TGTGGATGG 糖基转移酶的特征性保守序列，设计了引物gtl：5’GTC 3 ACCGTTGATTTGCAGCCC 7和gt2：5’GGT 3’。从该文库中提取重组的XgtIO 从插入了bak基因片段的pBAK质粒出发，将插入的BAK片段去除，空载体 DNA连接酶重新环化，EcoRV平端酶切，及3’末端加T后改造 pCRII质粒经T4 成一个可克隆PCR产物的T载体。 II，经序列测定，证实两个序列均含有终止密码子、 f将GTI和CT2插入pCR 的磷酸核糖焦磷酸合成酶有很高的同源性(与拟南芥磷酸核糖焦磷酸合成酶的同 设计引物时所依据的特征序列。其蛋白质产物与众多的植物次生产物葡萄糖基转 移酶具有较高的同源性(其中，与玉米UDPG：黄酮醇葡萄糖基转移酶的同源性 达44％)，推测是一个UDPG：甜菊糖苷葡萄糖基转移酶基因的3’端片段。 苷糖基转移酶cDNA。＼，-—／ l 关键词： 甜菊；甜菊糖苷葡萄糖基转移酶；基因克隆 ofa for Molecularand AnalasiscDNA Sequence Cloning Ⅵ)PG：steviol—glucose Abstract sweet Sf日viarebaudianaBertoni，theherbofSouthAmerica．which kindsof accumulatesseveral and moreandmore stable—chemical—propertysteviol—glucosides，arepaid attentionthese itiS tobecomea sourceof years，andvery1ikely major for sweetener naturefoodmarketinthefuture． the high—potency growing For directrelation the the between of and produce steviol—glucosides the