VIM-2型金属β-内酰胺酶酶学特性的分析.pdfVIP

2.18 重组菌 MBLVIM-2 药敏测定 26 3. 结果 26 3.1 PCR 结果 26 3.2 pUCm-T/VIM-2 重组质粒的酶切鉴定与序列分析 26 3.3 pET-41b(+)/VIM-2 重组质粒的酶切鉴定 29 3.4 重组质粒 pET-41b(+)/VIM-2 的测序结果 29 3.5 SDS电泳检测蛋白的表达及纯化 30 3.6 重组蛋白含量测定 30 3.7 重组蛋白质谱鉴定 31 3.8 重组菌 MBLVIM-2 药敏结果 31 4．讨 论 33 参考文献 34 第三部分 VIM-2 酶的酶学特性 36 1.β-内酰胺类抗生素对VIM-2 酶的稳定性及酶动力学研究 36 1.1 材料 36 1.1.1 药品与试剂 36 1.1.2 仪器 36 1.2 方法 36 1.2.1 酶的制备 36 1.2.2 确定各底物的最佳测定波长 37 1.2.3 酶稳定性测定 37 1.2.4 VIM-2 酶的米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）的求取 37 1.2.5 pH、温度、底物浓度以及 Na EDTA 对酶活性的影响 37 2 1.3 结果 38 1.3.1 14种β-内酰胺类抗生素的酶稳定性结果 38 1.3.2 VIM-2 酶的动力学特征 38 1.3.3 pH、温度、底物浓度以及 Na EDTA 对酶活性的影响 40 2 2. VIM-2 酶等电点的测定 42 2.1 材料 42 2.1.1 试剂 42 2.1.2 实验器材 42 2.2 方法 43 2.2.1 酶的制备 43 2.2.2 nitrocefin 鉴定β-内酰胺酶的活性 43 2.2.3 分析性等电聚焦电泳测定 VIM-2 酶等电点 43 2.3 结果 45 2.3.1 nitrocefin 鉴定β-内酰胺酶的活性 45 2.3.2 等电聚焦电泳结果 45 3.讨论 46 参考文献 48 综述 1 51 综述 2 56 致谢 63 攻读硕士学位期间发表论文 64 - 2 - 符号说明 符号说明 英文缩写 英文全称 中文译名 Amp ampicillin 氨苄西林 acrylamide 丙烯酰胺 APS ammonium persulfate 过硫酸铵 bis-acrylamide 双丙烯酰胺 AZM aztreonam 氨曲南 bp base pair(s) 碱基对 CaCl2 calcium chloride 氯化钙 CER cefaloridine 头孢噻啶 CFZ cefazolin 头孢唑啉 CFU