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ICS66.020.20 B31 DB32 江苏省地方标准 DB 32/ T XXXX—XXXX 铁皮石斛无菌播种苗生产技术规程 Technical code for producing aseptic seedlings of Dendrobium officinale kimura et Migo （报批稿） XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 江苏省质量技术监督局发布 前言 本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》编制。 本标准由苏州神元生物科技股份有限公司提出。 本标准起草单位：苏州神元生物科技股份有限公司、苏州市铁皮石斛研究院。 本标准起草人：滕士元、史骥清、郭传敏、赵锋、时剑、孙贺、王译、侯森广、张琳琳。 铁皮石斛无菌播种苗生产技术规程 范围 本标准规定了铁皮石斛无菌播种苗生产环境的消毒灭菌、培养基配制、培养条件调控、无菌播种苗生产工艺流程，以及商品苗的质量分级、包装、运输等。 本标准适用于铁皮石斛无菌播种苗的生产。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 LY/T 1882-2010 林木组织培养育苗技术规程 术语和定义 本标准采用下列定义。 铁皮石斛无菌播种苗 aseptic seedlings of Dendrobium officinale kimura et Migo 以铁皮石斛成熟蒴果的种子通过组织培养方法，在培养基上进行无菌播种、培养获得的种苗。 萌发培养 culture of germination 从种子播种，萌发出新叶的培养过程。 生长培养 culture of growth 萌发培养结束，将幼苗稀开转接至生长培养基，形成植株的培养过程。 生根培养 culture of rooting 生长培养结束，将幼苗再一次稀开转接至生根培养基，形成根系，成为成品苗的培养过程。 生产场地与设备 按照NY/T 2306-2013中的规定执行。 容器和器械清洗 容器采用650ml兰花组培瓶。清洗按照NY/T 2306-2013中的规定执行。 培养基配制和贮存 按照NY/T 2306-2013和LY/T 1882-2010中的规定进行。其中固化剂（琼脂等）可以采用粉末状，不需先加热溶化，和其它配制溶液混合均匀，在分装机内定容后，pH调整至5.7~5.8。边均匀搅拌、边分装。 灭菌、接种、培养室操作 按照NY/T 2306-2013中的规定执行。 无菌播种苗生产流程 无菌播种苗生产流程图 参见附录A。 蒴果的采集及处理 采集地选择 采集地周围1km范围内应无其它种类石斛。 采收和保存 经自然或人工授粉后，蒴果开始转黄时，选择饱满的果实连茎一起采收，采收后放于阴凉干燥处备用。 蒴果处理 取完整的蒴果在超净工作台上切除果柄和花蒂，按照NY/T 2306-2013中的规定执行灭菌。灭菌后的蒴果在超净台上晾干，当天播种。 萌发培养 将灭菌的蒴果，置于无菌滤纸上，在蒴果花蒂端切开一小口，用镊子夹住花柄端在培养瓶瓶口轻轻抖动，边抖动边转动培养瓶，将种子均匀地播撒于萌发培养基表面。一个蒴果接种5~8瓶。 接种后的培养瓶放于培养室，前3d为暗培养，第4d始光照强度为14.4~18μmol·m-2·s-1，第7d后光照强度增加至27~36μmol·m-2·s-1，光照时间为12h/d；温度25±3℃；培养60~90d。 生长培养 幼芽长至1~3mm时转接至生长培养基中进行培养，每瓶150~200株。 转接后的培养瓶放于培养室，光照强度为36~72μmol·m-2·s-1，光照时间为12h/d；温度为25±3℃；培养60~90d。 生根培养 幼苗长至1~1.5cm时转接至生根培养基中进行培养，每瓶20~40株。 转接后的培养瓶放于培养室，培养条件同8.4。 标签 每次接种后，将标注好播种日期、品种号、操作人工号等信息的标签贴于培养瓶上。 炼苗 当幼苗长至3~5cm高时，将培养瓶放置于温室自然散射光下炼苗，光照强度为144~180μmol·m-2·s-1，温度25±5℃，炼苗7~15d，即可进行销售或种植。 商品苗质量 质量要求 商品苗应为非污染、无烂茎、烂根、黄叶；叶片4片以上，正常展开，叶色翠绿。650ml兰花组培瓶每瓶40-45株。 商品苗分级 铁皮石斛商品苗分级 等级 根 （条） 叶片 （片） 株高 （cm） 茎粗 （cm） 一级苗 3~5 ＞6 ≥5.0 ≥0.3 二级苗 2~3 4~6 ≥3 ≥0.2 出售