多壁碳纳米管对骨细胞增殖及分化的影响.pdfVIP

摘要 摘要 nanotubes，CNTs)具有独特的物理、化学和生物特性，使 碳纳米管(carbon 其在骨组织修复材料的应用中得到广泛关注的热点材料之一。有关CNTs的细胞 毒理学研究还不够深入，已公开报道的研究结果也存在着极大的争议。一些研究 结果显示CNTs可引起一系列与细胞代谢有关的细胞凋亡、细胞周期间歇、氧化 ．应激反应、细胞信号转导和炎症反应发生。体外骨组织细胞生物兼容性的研究是 CNTs在骨组织工程的发展和骨组织工程材料的应用研究中亟待解决的关键科学 问题之一。本文结合CNTs毒理学研究新进展，以成骨细胞MC3T3．E1细胞株作 carbon 为模型细胞，考察两种不同长度的多壁碳纳米管(multi．wallednanotubes， MWCNTs)对MC3T3．E1细胞增殖与分化的影响并探讨其机制。具体如下： 采用混合酸化的方法纯化MWCNTs，得到分散性良好的MWCNTs悬液；用 J图像处理软件 多步超声过滤的方法分离出两种不同长度MWCNTs，并用Image 统计分析MwCNTs长度分布。 multi．walled 结果表明，短的MWCNTs(short carbon multi．walledcarbon nanotubes，L．MWCNTs)的平均长度约为681mn；用透射电镜 electron (transmissionmicroscope，TZM)、X射线光电能谱Ⅸ一rayphotoelectron —spectroscopy,xPs)、热重分析仪(thermogravimetricanalyzer,TGA)对两种不同 长度的MWCNTs进行理化表征分析。结果表明，两种长度的MWCNTs均具备 良好的分散性、管径均一，MWCNTs表面获得亲水性羧基基团。 法测定MWCNTs对MC3T3．E1细胞的毒性效应；碘化丙啶(propidiumiodide，PI) 单染结合流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡率；吖啶橙／溴化乙锭 bromide，AO／EB)双染进行细胞凋亡形态学观察。实验 (acridineorange／ethidium 结果表明，两种不同长度的MWCNTs均可对MC3T3．E1细胞产生剂量依赖性的 毒性效应，且100 MWCNTs作用MC3T3．E1细胞24h细胞活性与对照组 gg／mL 相比出现显着性抑制：FCM分析显示100MWCNTs作用细胞24h，与对 gg／rnL 摘要 凋亡的诱导效应。上述结果表明MWCNTs可能通过诱导细胞凋亡作用而导致细 胞活性降低。 利用异硫氰酸酯(fluorescin laser 激光共聚焦扫描显微镜(confocalscanningmicroscopy，CLSM)观察了两种 不同长度的MWCNTs在细胞内的分布与定位情况；利用FCM侧向角散射光特 性，定量分析MC3T3．E1细胞对MWCNTs的摄取率；利用荧光显微镜与扫描电 electron 镜(scanning 成骨细胞粘附的影响。CLSM观察发现，两种长度的MWCNTs均在胞浆中聚集； FCM分析发现细胞摄取MWCNTs呈浓度依赖性，但无长度依赖性；1 00肛g／mL MWCNTs处理细胞24 4-1．2％