第章糖和苷精品.ppt

* * 操作过程： 除LH-20外，均在H2O中进行。 ①将凝胶在适当的溶液中浸泡（多为洗脱剂）； ②待充分膨胀后装入层析柱； ③用洗脱液洗脱； ④收集、回收溶液，干燥。 第七节 糖及苷的提取分离 * * 洗脱溶剂的选择： 分离中性物质——水及电解质溶液 （酸、碱、盐溶液及缓冲液） 阻滞较大的组分——水+有机溶液 （水-甲醇、水-乙醇、水-丙酮等） LH-20可用有机溶液进行溶胀（如：CHCl3、丁醇、二氧六环等） (适用：有机物质的分离，如：脂类、固醇类等) 第七节 糖及苷的提取分离 * * 5．季铵氢氧化物沉淀法 季铵氢氧化物是一类乳化剂。 第七节 糖及苷的提取分离 * * 6．分级沉淀或分级溶解法 在糖的水溶液中，逐步加入乙醇，即逐渐增大EtOH浓度，可得到各部分的沉淀物。 为使多糖稳定，多糖通常在pH=7时进行 酸性多糖在pH=2~4时进行 处理酸性多糖时，为防酸水解苷键，操作宜迅速。 第七节 糖及苷的提取分离 * * 7．蛋白质除去法 用分级沉淀法得到的多糖，常夹杂有较多的蛋白质，为除之，通常选择能使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如：酚、三氯乙酸、鞣酸等。 注意：处理时间要短，温度要低。 （避免多糖降解） 三氟三氯乙烷法和Sevag法（用氯仿：戊醇或丁醇4：1混合）在避免降解上有较好效果。 第七节 糖及苷的提取分离 * * ㈢ 糖的提取分离实例 地黄根中单糖和低聚糖的分离 取鲜根→热EtOH、H2O提→阴阳离子交换树脂（除酸碱成分）得中性成分 活性炭柱（15%HOAc处理） 以H2O、稀EtOH（5、10、15、 25% 顺次洗脱）,经PC检定，合并 D-葡萄糖 D-半乳糖 D-果糖 蔗糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖(四糖) 毛蕊糖(五糖) 第七节 糖及苷的提取分离 * * 本章重点内容 掌握常见几种单糖的结构（Haworth式）； 掌握化学反应的特点及应用； 掌握苷键裂解的各种方法及其特点； （如：酸解、碱解、酶解、Smith降解等） 1H-NMR及13C-NMR在糖苷中的应用 （如：苷键构型的测定、化学位移值大致区间、糖端基碳的化学位移值、利用J值判断苷键构型、苷化位移（含酚苷和酯苷）等。） * * 三、碱催化水解和β消除反应 一般苷键对稀碱是稳定的，但某些特殊的苷易为碱水解，如： 酯苷 酚苷 烯醇苷 β-吸电子基取代的苷 第四节 苷键的裂解 * * C1-OH与C2-OH： 反式易水解，其产物为1,6-葡萄糖酐； 顺式产物为正常的糖。 利用水解产物可判断苷键构型 第四节 苷键的裂解 * * β-消除反应： 苷键的β-位有吸电子基团者，使α-位氢活化，在碱液中与苷键起消除反应而开裂，称~。 作用机理： 在1→3或1→4连接的聚糖中，还原端的游离醛（或酮）邻位氢活化而与3-O-或4-O-苷键起消除反应。这样碱能使多糖还原端的单糖逐个被剥落，对非还原端则无影响。剥落生成的是α-羟基糖酸。 第四节 苷键的裂解 * * β-消除反应作用过程： 第四节 苷键的裂解 * * 用途： 可从多糖剥落反应生成的糖酸中了解还原糖的取代方式。 3-O-代的糖可形成——3-脱氧糖酸 4-O-代的糖可形成——3-脱氧-2-羟甲基糖酸 二个以上取代的还原糖——难生成糖酸 第四节 苷键的裂解 * * 四、酶催化水解反应 用酶水解苷键可以获知苷键的构型，可保持苷元结构不变的真正苷元。 酶专属性高，选择性地催化水解某一构型的苷。 如： 苦杏仁酶（emulsin）——水解——β-葡萄糖苷键 纤维素酶（cellulase）——同上 麦芽糖酶（maltase）——水解——α-葡萄糖苷键 第四节 苷键的裂解 * * 一、糖的鉴定 1．纸层析 展开系统：常用水饱和的有机溶剂展开。 如：正丁醇：醋酸：水（4：1：5上层）BAW 水饱和苯酚等溶剂系统。 显色剂：邻苯二甲酸苯胺、硝酸银试剂(使还原糖显棕黑 色)、三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色）、3,5