交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及其生产大豆异黄酮活性苷元的研究.pdf

交联B．葡萄糖苷酶聚集体的制备 及其生产大豆异黄酮活性苷元的研究 摘要 大豆异黄酮是从大豆中提取的一种植物雌性激素，具有天然抗氧化 性、预防癌症、保护心血管和防止骨质疏松等多种生理活性。大豆异黄酮 主要以无活性的糖苷形式存在，需经人体肠道中微生物产生的B一葡萄糖 苷酶水解为活性苷元才能被吸收进入体内发挥作用，但酶数量有限，导致 生物利用度很低。本论文旨在利用无载体固定化技术制备高活性和高稳定 性的交联B．葡萄糖苷酶聚集体，为大豆异黄酮活性苷元的生产提供基础。 研究对象，将游离B一葡萄糖苷酶用硫酸铵沉淀后，以戊二醛作交联剂对其 进行化学交联，制备新型的交联B．葡萄糖苷酶聚集体，并对影响交联酶聚 集体活性的主要因素进行单因素考察，确定了交联B．葡萄糖苷酶聚集体的 制备条件为： 聚集条件：0．34 冰水浴条件下，经90％饱和度的硫酸铵沉淀30min，可获得比较理想的B． 葡萄糖苷酶聚集体。 交联条件：B一葡萄糖苷酶聚集体以5％戊二醛水溶液于30℃下交联 收率可达77．4％。 酶学性质研究表明，交联B．葡萄糖苷酶聚集体的最适温度、最适pH 明，交联B．葡萄糖苷酶聚集体显示出了更强的热稳定性、pH稳定性、贮 存稳定性和对底物的亲和力。 对交联B．葡萄糖苷酶聚集体进行电镜扫描显示，其表面疏水性高且糖 基化程度低，结构紧密，颗粒呈球状形式，直径约为800nm左右，每个 体交联前后的结构进行红外光谱分析表明，交联B．葡萄糖苷酶聚集体中存 在较多的由氨基与醛基反应形成的酰胺键，验证了B一葡萄糖苷酶聚集体通 过戊二醛的交联作用，形成结构紧密的交联酶聚集体。将制备的交联B．葡 萄糖苷酶聚集体用于合成大豆异黄酮活性苷元染料木素，对染料木苷水解 转化率约为66％。重复使用10批次后，交联酶聚集体对染料木苷仍能保 持35％左右的转化效率，表明其具有良好的使用稳定性。 关键词：黑曲霉 8．葡萄糖苷酶 交联酶聚集体 无载体固定化 大豆异黄酮 ofCross-linked Preparation B-glucosidase andIts for Isoflavone ApplicationSoybean ABSTRACT all roleinthe ofdiversechronic Soybean important prevention diseases， plays whichhasattractedattention．The is great soybean，especiallysoybeanhypocotyl enrichedin anddaidzin． health·promotingisoflavones，mainlyincludinggenistin that studiesshowedindividualswith isoflavone—richdiets Epidemiological SO·ybean as have loweroccurrencesofsomecancersand heartdiseases evidently coronary