光滑球拟酵母内酰CoA水平调控对其碳代谢流的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 本文以一株能在胞外大量积累丙酮酸和仪一酮戊二酸(Ⅸ一KG)的光滑球拟酵母 (Torulopsis 加维生素和乙酸、过量表达acetyl—CoA合成酶和过量表达丙酮酸脱羧酶等三种策略，调 酸。主要研究结果如下： 1．随着培养基中唯一碳源乙酸钠浓度的升高，菌体浓度不断升高。当培养基中乙酸钠浓 度为6g／L时，细胞浓度和仪．KG浓度(13．5 的浓度为36．63士2．08 nmollg 6 发酵培养基中添加乙酸钠浓度为6g／L时，仪．KG的产量达到最高值13．35g／L，胞内 Acetyl．CoA为6。09士0．61 l且mol／g 水平随着培养基中VBl和乙酸钠浓度的增加而增加，同时促进了仪．KG的合成。当Vm 的浓度为0．015 mg／L时，Ⅸ-KG的产量最高达13。02g／L，胞I为Acetyl—CoA为6．42J-tmol绝 DCW，Acetyl．CoA／CoA比值达到0．92，Ca．Ko／CvYR的值为O．50。 2．为了研究acetyl．CoA及其衍生物在细胞内的形式和含量对代谢途径及代谢流量的影 (1．20U／mgprotein)的重组菌Z T DCW的 glabrataACS2—1：(1)能以乙酸为唯一碳源在胞内积累0．94I-tmol／g 出发菌株WSH．IP303的3．22、2．05和2．52倍；(3)在葡萄糖培养基中添)31：14gmZ,酸，导 倍，O‘．KG浓度达到17．8 g／L。 3．将来源于酿酒酵母中编码丙酮酸脱羧酶PDCl基因过量表达于发酵法生产丙酮酸的 工业菌株Torulopsis 摘要 ±O．09 U／mgproteind)的重组菌ZglabrataPDCl．1。在葡萄糖培养基中添加30∥L丙 酮酸时，重组菌Z PDCl—1与对照菌株Z glabrata of 脱羧酶活性提高了14．16倍(7．22：e0．09U‘mg protein-1)；(2)重组菌株Z glabrata PDCl-1 0【．KG产量和C甜KdCp”分别为：38．8g／L和1．39，分别是对照菌的182％和 284％；(3)重组菌Zglabrata DCW和 acetyl．CoA／CoA比对照菌分别提高了2．38倍和3．76倍，达到17．55 l上mol／g CCTCC 2．37，而CoA浓度则降低了11．1％；(4)ZglabrataM202019是乙酸渗漏缺陷 型菌株，其丙酮酸脱羧酶活性组成型降低。在普通发酵培养基中重组菌Zglabrata PDCl．1的PDCl活力是ZCCTCC glabrata g／L)和7倍(1．68)。 产量和Ca．Ko／Cpyr比值分别是其的4．55倍(31．2 关键词：acetyl-CoA，CoA，0【一KG，代谢通量 Ⅱ Abstract Abstract Thisthesischosetheaccumulationof and