β-（1→3）d-葡聚寡糖衍生物的设计合成、生物活性测定及寡糖芯片的构建.pdf

摘摘 要要 摘摘 要要 糖生物学的研究领域主要包括糖缀合物糖链的化学合成与结构分析 糖缀合物 糖链的生物合成 糖缀合物糖链在复杂生物系统中的功能 以及糖缀合物糖链操作 技术 结构辅助并基于机理进行有目的药物设计 仍是当前药物设计的主流 它可 以为糖生物学开辟一个新的领域 而糖芯片可以广泛地用于研究糖类 例如高通量 分析糖-蛋白的相互作用 药物基因组学等 是后基因组时代必不可少的一种研究 工具 本文的主要工作是研究了 -(1 3)-D-葡聚寡糖衍生物的设计合成 生物活 性测定和寡糖芯片的构建 完成的工作主要包括以下几个方面 采用酸碱法来提取啤酒酵母中的 -(1 3)-D-葡聚糖 纸色谱和紫外光谱分析 表明 所得产物为高纯度的 -(1 3)-D-葡聚糖 此结论由傅立叶红外(FTIR)光谱得 到进一步的证实 这表明酸碱法是从啤酒酵母中提取 -(1 3)-D-葡聚糖的理想途 径 (FACE) 8- 荧光辅助糖电泳 是一种快捷 花费少的分离糖类方法 寡糖首先经 氨 基萘基-1,3,6-三磺酸(ANTS)胺化还原衍生 此反应过程在所给实验条件下需要 16h 然后 ANTS 衍生的寡糖在由 32 丙烯酰胺-2.4 双丙烯酰胺组成的碱性分离 胶上电泳从而得以分离 此方法无需专门的仪器和操作熟练的技术人员 实验结果 表明 当糖的浓度范围在 5 100pM 之间时 带的荧光强度和糖的浓度之间成线性 关系 并且没有哪个链长比其它的链长更加容易衍生化 用 2.0mol/L 的 CF3COOH 来水解酵母葡聚糖 得到的寡糖混合物经 FACE 分 析 1-7 -(1 3)-D- 结果证实得到了聚合度为 的 葡聚寡糖 根据 -(1 3)-D-葡聚糖酶的作用机理 设计出环氧烷基- -(1 3)-D-葡聚寡 糖 然后经过乙酰化 糖苷化 氧化和去乙酰化这四步来合成它 用 ESI-MS 分析 了所得到的一产物 酶活性分析表明 在 -(1 3)-D-葡聚寡糖分子中引入环氧烷基后 的确能够提 高其抗酶水解能力 并且所引入环氧烷基的链长越短 其抗酶水解能力越强 -(1 3)-D- 3,4- 测定了 葡聚寡糖及其 环氧丁基衍生物对超氧阴离子自由基的清 除作用 对动物免疫调节的影响 对单核细胞产生超氧阴离子的影响 对 Con A 诱 I 导的小鼠脾淋巴细胞增殖实验的影响 以及对植保素生成的影响 结果表明 在 0.1μg/mL -(1 3)-D- 3,4- 这个浓度上 葡聚寡糖及其 环氧丁基衍生物均对超氧阴离 子有一定的清除作用 在 200μg/mL 这个浓度上 -(1 3)-D-葡聚寡糖及其 3,4- 环氧丁基衍生物对提高巨噬细胞吞噬功能均有显著作用 在 20μg/mL 这个浓度 -(1 3)-D- 3,4- 上 葡聚寡糖及其 环氧丁基衍生物均对人体单核细胞有较强的激活 作用 在 200μg/mL 这个浓度上 -(1 3)-D-葡聚寡糖及其 3,4-环氧丁基衍生物 对 Con A 诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖有一定的促进作用 在诱导植保素的生成过 程中 -(1 3)-D-葡聚寡糖的活性要比其 3,4-环氧丁基衍生物稍低 且 -(1